發(fā)布時間：2017-12-15 03:29

  本文關(guān)鍵詞：家蠶microRNA 7靶基因Bmhairy的鑒定和轉(zhuǎn)錄表達模式

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【摘要】：【目的】micro RNA是一類長約22個堿基的非編碼RNA,通過與其靶基因的特異性結(jié)合來調(diào)控新陳代謝和生長發(fā)育等多種生命活動。鑒定家蠶(Bombyx mori)Bmhairy,比較Bmhairy和bmo-mi R-7的表達模式,驗證Bmhairy是否為bmo-mi R-7的靶基因,為研究家蠶的變態(tài)發(fā)育機制提供線索�！痉椒ā坑眉倚Q胚胎反轉(zhuǎn)期的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成的c DNA模板,克隆Bmhairy編碼區(qū)(coding DNA sequence,CDS)和3′端非翻譯區(qū)(3′untranslated region,3′UTR)并進行序列分析。基于熒光定量PCR和芯片數(shù)據(jù)比較bmo-mi R-7和Bmhairy的表達模式。利用RNAhybrid和Mi RTif,預(yù)測和分析Bmhairy的m RNA 3′UTR上bmo-mi R-7的靶位點。構(gòu)建熒光素酶報告基因載體,用家蠶胚胎細胞系(Bm E)進行共轉(zhuǎn)染試驗,驗證bmo-mi R-7對Bmhairy的3′UTR結(jié)合位點。【結(jié)果】在家蠶中克隆了Bmhairy,含2個內(nèi)含子和3個外顯子,CDS長654 bp,編碼217個氨基酸。Bmhairy的m RNA 3′UTR長366nt。Bmhairy高度保守,含有b HLH、ORANGE和WRPW結(jié)構(gòu)域。Bmhairy與鱗翅目(Lepidoptera)蛺蝶科(Nymphalidae)中的黑脈金斑蝶(Danaus plexippus)相似度最高。Bmo-mi R-7在家蠶胚胎期高量表達,在5齡第3天的精巢中相對較高,而Bmhairy在成蟲期的表達量最高,在5齡第3天的頭部相對較高。Bmhairy m RNA 3′UTR上有bmo-mi R-7一個靶位點。共轉(zhuǎn)染試驗表明,bmo-mi R-7下調(diào)Bmhairy�！窘Y(jié)論】Bmhairy的家蠶時期表達和5齡第3天組織表達均與bmo-mi R-7的表達呈相反的模式。靶基因預(yù)測和雙熒光素酶轉(zhuǎn)染試驗表明Bmhairy是bmo-mi R-7的靶基因,為進一步研究bmo-mi R-7和Bmhairy在家蠶體內(nèi)的生物學(xué)功能及調(diào)控關(guān)系提供了依據(jù)。
【作者單位】： 西南大學(xué)家蠶基因組生物學(xué)國家重點實驗室;
【基金】：國家“973”計劃(2012CB114602) 國家自然科學(xué)基金(31071136,31571334) 重慶市基礎(chǔ)與前沿研究計劃(cstc2014jcyj A00025)
【分類號】：S881.2
【正文快照】： 0引言【研究意義】克隆家蠶(Bombyx mori)Bmhairy編碼序列和3′UTR序列、比較bmo-mi R-7和Bmhairy表達模式、驗證Bmhairy是否為bmo-mi R-7的靶基因,對于深入研究bmo-mi R-7和Bmhairy的生物學(xué)功能以及鱗翅目昆蟲的變態(tài)發(fā)育機制具有重要意義�！厩叭搜芯窟M展】Hairy在果蠅體節(jié)形

【相似文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張丹宇;家蠶bmo-miR-7靶基因Bmhairy的鑒定[D];西南大學(xué);2010年

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本文編號：1290475