本文關(guān)鍵詞：銹赤扁谷盜幾丁質(zhì)合成相關(guān)的基因研究和功能驗(yàn)證

  更多相關(guān)文章： 銹赤扁谷盜 基因功能 dsRNA 目的基因 RNA干擾

【摘要】：銹赤扁谷盜Cryptolestes ferrugineus(Stephens)是一種體型較小但是危害嚴(yán)重的儲(chǔ)糧害蟲。本文采用分子生物學(xué)的方法,研究銹赤扁谷盜編碼幾種幾丁質(zhì)生物合成相關(guān)酶基因的特性和功能。論文主要研究4種幾丁質(zhì)合成相關(guān)的基因,即幾丁質(zhì)合成酶基因(Chitin Synthase,CHS),UDP-N-乙酰氨基葡萄糖叫磷酸化酶基因(UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase,UAP),酪氨酸羥化酶基因(Tyrosine hydroxylase,TH)和漆酶基因(Laccase,LAC)的時(shí)空表達(dá)。在此基礎(chǔ)上,體外合成酪氨酸羥化酶基因和漆酶基因的dsRNA,通過飼喂和顯微注射的方式將dsRNA引入到銹赤扁谷盜蟲體內(nèi),研究這些基因沉默后對銹赤扁谷盜發(fā)育過程中表現(xiàn)型的差異,并通過RT-PCR技術(shù)研究LAC和TH基因沉默后的mRNA在銹赤扁谷盜體內(nèi)相對表達(dá)量的變化,從而驗(yàn)證2種基因在銹赤扁谷盜體內(nèi)的功能。結(jié)果如下:1、銹赤扁谷盜不同發(fā)育階段中進(jìn)行基因表達(dá)分析的內(nèi)參基因是Ribosomal protein S18,即RPS18基因,且RPS18是唯一內(nèi)參基因。而ADP ribosylation factor 1即ARF1,則是銹赤扁谷盜不同組織進(jìn)行基因表達(dá)分析唯一需要的內(nèi)參基因。2、經(jīng)過擴(kuò)增得到3個(gè)幾丁質(zhì)合成相關(guān)酶基因的片段,經(jīng)過轉(zhuǎn)錄組分析得到幾丁質(zhì)合成相關(guān)酶基因的全長序列,利用RT-PCR技術(shù)研究了幾丁質(zhì)合成相關(guān)酶基因的時(shí)空表達(dá)差異。結(jié)果表明:漆酶基因(LAC)的部分片段在銹赤扁谷盜不同組織中的表達(dá)量具有顯著性差異且在頭部表達(dá)量最高,LAC全長基因在銹赤扁谷盜不同組織中的表達(dá)量沒有顯著性差異。酪氨酸羥化酶基因(TH)的部分片段以及全長基因在銹赤扁谷盜不同組織間表達(dá)量差異極顯著且變化趨勢保持一致,兩者均在銹赤扁谷盜頭部表達(dá)量最高,胸部次之,中腸的表達(dá)量最低。幾丁質(zhì)合成酶1基因(CHS1)和幾丁質(zhì)合成酶2基因(CHS2)在銹赤扁谷盜體內(nèi)的時(shí)空表達(dá)具有顯著性差異。幾丁質(zhì)合成酶1基因(CHS1)在銹赤扁谷盜的蛹期表達(dá)量最高,老熟幼蟲表達(dá)量最低,并且表達(dá)量最高的部位分布在頭部。幾丁質(zhì)合成酶2基因(CHS2)在銹赤扁谷盜成蟲時(shí)期表達(dá)量最高,蛹期表達(dá)量最低,且主要集中表達(dá)在在銹赤扁谷盜的胸部。3、利用顯微注射技術(shù)和納米殼聚糖介導(dǎo)飼喂的方法研究酪氨酸羥化酶基因(TH)和漆酶基因(LAC)在銹赤扁谷盜生長發(fā)育過程中的作用。結(jié)果表明無論是由納米殼聚糖介導(dǎo)的dsRNA的飼料的飼喂還是直接經(jīng)過dsRNA顯微注射方法,2種基因沉默后均使目的基因mRNA的相對表達(dá)量顯著下降,幼蟲不能正常蛻皮和化蛹,其校正死亡率顯著升高。研究結(jié)果說明了4種幾丁質(zhì)生物合成相關(guān)基因在銹赤扁谷盜發(fā)育過程中均起重要作用,為利用生物技術(shù)綜合防治銹赤扁谷盜提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河南工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S379.5

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 陸建良;林晨;楊曉麗;鄭新強(qiáng);梁月榮;;昆蟲幾丁質(zhì)合成酶特性預(yù)測[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2008年05期

2 王殿軒,原鍇,武增強(qiáng),王紅軍,董文杰,高希武;銹赤扁谷盜與其它幾種儲(chǔ)糧害蟲對磷化氫的耐受性比較[J];鄭州工程學(xué)院學(xué)報(bào);2004年01期

3 曹陽,劉梅,鄭彥昌;五種儲(chǔ)糧害蟲11個(gè)品系的磷化氫抗性測定[J];糧食儲(chǔ)藏;2003年02期

4 曹陽,王殿軒;米象和赤擬谷盜不同品系成蟲的磷化氫擊倒時(shí)間與其抗性之間的關(guān)系[J];鄭州糧食學(xué)院學(xué)報(bào);2000年02期

5 蔣中柱;劉曉夫;;三種扁谷盜成蟲對磷化氫抗性研究報(bào)告[J];糧食儲(chǔ)藏;1990年02期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 冷本好;磷化氫熏蒸尾氣光降解研究[D];河南工業(yè)大學(xué);2013年

，

本文編號：1278720