本文關(guān)鍵詞：藤黃生孢鏈霉菌NRRL 2401遺傳操作系統(tǒng)和基因文庫的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 藤黃生孢鏈霉菌 接合轉(zhuǎn)移 基因文庫 PCR篩選

【摘要】：【目的】建立藤黃生孢鏈霉菌NRRL 2401的遺傳操作系統(tǒng)和基因文庫,以便篩選次級代謝產(chǎn)物生物合成基因�！痉椒ā坷么竽c桿菌和鏈霉菌的屬間接合轉(zhuǎn)移的方法,以整合型載體pPM927、pSET152和復(fù)制型載體pJTU1278構(gòu)建鏈霉菌遺傳操作系統(tǒng)。以pCClFOS~(TM)載體,大腸桿菌EP1300~(TM)-T1~R為宿主菌構(gòu)建Fosmid文庫。隨后,設(shè)計引物,利用"板池-行池-單克隆"的三級PCR方法對文庫進(jìn)行快速篩選�！窘Y(jié)果】pPM927、pSET152和pJTU1278均成功轉(zhuǎn)入藤黃生孢鏈霉菌NRRL 2401,其中pSET152載體的轉(zhuǎn)化效率最高。構(gòu)建了穩(wěn)定高效的藤黃生孢鏈霉菌NRRL 2401的基因文庫,含2880個克隆,平均插入片段大小約為35 kb,空載率小于1%,文庫覆蓋率為99.99%,覆蓋基因組16.5倍。同時,初步篩選出可能含有吲哚霉素生物合成基因簇的9個陽性克隆�！窘Y(jié)論】成功構(gòu)建了穩(wěn)定高效的藤黃生孢鏈霉菌NRRL 2401遺傳操作系統(tǒng)和高質(zhì)量的基因文庫,為克隆該菌中次級代謝產(chǎn)物生物合成基因簇以及進(jìn)一步遺傳改造奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院微生物代謝國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31170085) 國家“973項目”(2012CB721004)~~
【分類號】：Q933
【正文快照】： 藤黃生孢鏈霉菌(Streptomyces luteosporeus似的結(jié)構(gòu)(如圖1-A),可以通過細(xì)菌的芳香族化合NRRL 2401)于1990年由德國科學(xué)家Dagmar Witt和物攝取機(jī)制進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)[4],作為色氨酸的一種Erko Stackebrandt發(fā)現(xiàn),它可以產(chǎn)生具有良好生物競爭性抑制劑,抑制色氨酸t(yī) RNA的合成[5 8]。

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;生物學(xué)中容易混淆的術(shù)語(Ⅶ)[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2002年03期

2 陳雄風(fēng),劉澎濤,蔣耀青,黃華j;鯉魚基因文庫的構(gòu)建[J];遺傳;1987年02期

3 潘志強(qiáng);孔德謇;陳章良;;橡膠樹基因文庫的構(gòu)建[J];熱帶作物學(xué)報;1990年02期

4 梁濤;鄭洪剛;董金鐸;王斌;姜國勇;;栽培花生徐州68-4核基因文庫的構(gòu)建[J];萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報;1990年03期

5 安彩泰;;基因文庫[J];生物學(xué)通報;1991年03期

6 黃解于,吳祥甫;家蠶的基因文庫[J];昆蟲學(xué)報;1993年02期

7 趙守城,張岸平;魚類基因文庫的構(gòu)建及其意義[J];河北漁業(yè);1997年03期

8 王德枝;;基因文庫的構(gòu)建與使用[J];生物學(xué)教學(xué);2010年12期

9 秦德安;;關(guān)于基因文庫的一般介紹[J];生物學(xué)教學(xué);1988年01期

10 陶全洲;翁堅;周光宇;;水稻基因文庫的構(gòu)建[J];生物工程學(xué)報;1986年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 曹祥榮;張文;湯文文;張錫然;徐春茂;王強(qiáng);胡均;;毛冠鹿睪丸組織cDNA基因文庫的構(gòu)建及P1精蛋白基因的克隆[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2005年學(xué)術(shù)大會、青年學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 河南省伊川高中 孫雪茹;淺談基因文庫[N];學(xué)知報;2011年

2 羅剛;構(gòu)建基因文庫解析病毒密碼[N];健康報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 向隆寬;卡特利鏈霉菌A520基因文庫的構(gòu)建以及硫霉素生物合成基因的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 劉勇;Pyrococcus horikoshii OT_3基因文庫的構(gòu)建和新酶的篩選[D];吉林大學(xué);2004年

2 黃河青;一種基于構(gòu)件重組原理構(gòu)建基因文庫方法的研究[D];青島科技大學(xué);2011年

3 張彥斌;西藏當(dāng)雄地區(qū)傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品微生物宏基因文庫構(gòu)建與乳酸菌生物多樣性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 洪芳;極端嗜熱厭氧纖維素分解菌2菌株基因文庫的構(gòu)建及其纖維素酶系內(nèi)切葡聚糖酶（ED）基因片段的克隆[D];四川大學(xué);2004年

5 崔志輝;抑制差減雜交法構(gòu)建鳙魚染毒微囊藻毒素-LR后差異表達(dá)基因文庫及相關(guān)基因表達(dá)分析[D];上海海洋大學(xué);2011年

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