本文關(guān)鍵詞：鐵皮石斛赤霉素3-氧化酶基因的克隆及表達分析

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【摘要】：目的克隆珍稀瀕危藥用植物鐵皮石斛Dendrobium officinale赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)基因(Do GA3ox),并進行生物信息學(xué)和表達分析。方法采用RACE和RT-PCR技術(shù)獲得Do GA3ox基因c DNA全長;利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測其編碼蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)域及亞細(xì)胞定位等分子特性;用DNASTAR 7.0和MEGA 6.0軟件分別對其進行氨基酸多序列比對和進化關(guān)系分析;借助實時熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測基因表達模式。結(jié)果克隆到Do GA3ox基因(Gen Bank注冊號KT597694),c DNA全長1 318 bp,編碼一條由353個氨基酸組成的多肽,相對分子質(zhì)量為39 052.5,等電點6.21;Do GA3ox蛋白不含跨膜域和信號肽,具有GA3ox的保守結(jié)構(gòu)域DIOX_N(40~130)和2OG-Fe II_Oxy(197~299);Do GA3ox與大蔥、油棕、海棗、野茶樹及藍(lán)豬耳GA3ox蛋白一致性分別為55%、56%、54%、51%、50%,與單子葉植物大蔥、油棕和海棗的親緣關(guān)系較近。q RT-PCR實驗結(jié)果顯示Do GA3ox基因在鐵皮石斛種子共生(非共生)萌發(fā)1~3級時,其相對表達量呈現(xiàn)出先升高后降低再升高的趨勢,分別為未萌發(fā)種子的13.44(5.21)、7.28(2.32)和9.40(6.21)倍,由此可知,該基因在共生萌發(fā)種子中的表達量高于非共生萌發(fā)種子。結(jié)論首次克隆得到1個Do GA3ox基因的全長c DNA,其轉(zhuǎn)錄本在共生和非共生不同萌發(fā)級別種子中的表達特性說明該基因在鐵皮石斛種子萌發(fā)中起著重要調(diào)控作用。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所;
【基金】：教育部博士點基金優(yōu)先發(fā)展領(lǐng)域(20131106130002) 藥植所創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃(PIRTI-IT1302) 中央公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項(YZ-12-14) 中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(201407005)
【分類號】：S567.239
【正文快照】： 鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo為單子葉植物綱(Monocotyledoneae)蘭科(Orchidaceae)石斛屬Dendrobium Sw.多年生草本植物,作為中華九大仙草之首,具有益胃生津、滋陰清熱、潤肺止咳、明目強身等功效,是石斛屬藥用植物中最為珍稀名貴的種[1-2]。和其他蘭科植物

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