本文關(guān)鍵詞：碭山酥梨肉桂酸4-羥化酶基因的克隆及表達分析

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【摘要】：木質(zhì)素是梨(Pyrus)石細胞的重要成分之一,木質(zhì)素合成代謝對石細胞形成發(fā)育有著重要影響。肉桂酸4-羥化酶(cinnamate 4-hydroxylase,C4H,EC 1.14.13.11)是細胞色素單加氧酶超家族中CYP73A亞家族的一員,同時為木質(zhì)素合成代謝中的一個關(guān)鍵酶。本研究從碭山酥梨(Pyrus bretschneideri cv.Danshan Su)果實中克隆出一條肉桂酸4-羥化酶基因的全長c DNA序列,命名為Pb C4H,Gen Bank登錄號為:KF663548。Pb C4H全長1 764 bp,具有1 515 bp的ORF,編碼504個氨基酸。Pb C4H與多個物種C4H基因編碼的氨基酸序列具有較高的同源性,說明其在進化過程中較為保守。結(jié)構(gòu)域分析表明,Pb C4H具有跨膜結(jié)構(gòu)域和典型的細胞色素P450結(jié)構(gòu)域特征。q RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)在梨果實發(fā)育的不同時期,Pb C4H基因表達量呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢,其中在花后55 d達到最高。構(gòu)建了Pb C4H原核表達載體p ET-32aPb C4H,在大腸桿菌(Escherichia coli)BL21菌株中誘導(dǎo)表達出Pb C4H融合蛋白。亞細胞定位表明Pb C4H蛋白定位于細胞膜上。本研究結(jié)果為利用分子生物學(xué)技術(shù)調(diào)控梨木質(zhì)素的合成和石細胞的發(fā)育提供了基礎(chǔ)資料。
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.30771483;No.31171944和No.31640068) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新基金(No.XJ2015258)
【分類號】：S661.2
【正文快照】： *同等貢獻作者碭山酥梨(Pyrus bretschneideri cv.Dangshan Su)是我國四大名梨之一,產(chǎn)于安徽省碭山縣,屬白梨系品種,因其甘甜酥脆、營養(yǎng)豐富,還有去熱清痰止咳潤肺等藥用價值,馳名海內(nèi)外。梨果實石細胞團的大小及密度對其內(nèi)在品質(zhì)有著重要影響,目前研究表明,石細胞是由于薄壁

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