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  本文關(guān)鍵詞：碭山酥梨肉桂酸4-羥化酶基因的克隆及表達(dá)分析

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【摘要】：木質(zhì)素是梨(Pyrus)石細(xì)胞的重要成分之一,木質(zhì)素合成代謝對(duì)石細(xì)胞形成發(fā)育有著重要影響。肉桂酸4-羥化酶(cinnamate 4-hydroxylase,C4H,EC 1.14.13.11)是細(xì)胞色素單加氧酶超家族中CYP73A亞家族的一員,同時(shí)為木質(zhì)素合成代謝中的一個(gè)關(guān)鍵酶。本研究從碭山酥梨(Pyrus bretschneideri cv.Danshan Su)果實(shí)中克隆出一條肉桂酸4-羥化酶基因的全長(zhǎng)c DNA序列,命名為Pb C4H,Gen Bank登錄號(hào)為:KF663548。Pb C4H全長(zhǎng)1 764 bp,具有1 515 bp的ORF,編碼504個(gè)氨基酸。Pb C4H與多個(gè)物種C4H基因編碼的氨基酸序列具有較高的同源性,說(shuō)明其在進(jìn)化過(guò)程中較為保守。結(jié)構(gòu)域分析表明,Pb C4H具有跨膜結(jié)構(gòu)域和典型的細(xì)胞色素P450結(jié)構(gòu)域特征。q RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)在梨果實(shí)發(fā)育的不同時(shí)期,Pb C4H基因表達(dá)量呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢(shì),其中在花后55 d達(dá)到最高。構(gòu)建了Pb C4H原核表達(dá)載體p ET-32aPb C4H,在大腸桿菌(Escherichia coli)BL21菌株中誘導(dǎo)表達(dá)出Pb C4H融合蛋白。亞細(xì)胞定位表明Pb C4H蛋白定位于細(xì)胞膜上。本研究結(jié)果為利用分子生物學(xué)技術(shù)調(diào)控梨木質(zhì)素的合成和石細(xì)胞的發(fā)育提供了基礎(chǔ)資料。
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.30771483;No.31171944和No.31640068) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新基金(No.XJ2015258)
【分類號(hào)】：S661.2
【正文快照】： *同等貢獻(xiàn)作者碭山酥梨(Pyrus bretschneideri cv.Dangshan Su)是我國(guó)四大名梨之一,產(chǎn)于安徽省碭山縣,屬白梨系品種,因其甘甜酥脆、營(yíng)養(yǎng)豐富,還有去熱清痰止咳潤(rùn)肺等藥用價(jià)值,馳名海內(nèi)外。梨果實(shí)石細(xì)胞團(tuán)的大小及密度對(duì)其內(nèi)在品質(zhì)有著重要影響,目前研究表明,石細(xì)胞是由于薄壁

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