本文關(guān)鍵詞：林麝肺源致病性大腸桿菌部分耐藥基因檢測(cè)及crl毒力基因缺失株的構(gòu)建

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【摘要】：林麝肺炎和化膿性疾病是林麝規(guī)模化養(yǎng)殖中的主要疾病之一,無論發(fā)病率還是致死率都比較高,它一直以來都嚴(yán)重地阻礙著人工養(yǎng)麝業(yè)的可持續(xù)性發(fā)展。林麝肺源致病性大腸桿菌(Lung Pathogenic Escherichia coli,LPEC)是引起該病的重要病原菌之一。本文對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期分離鑒定的29株林麝LPEC開展了以下研究：采用玻片凝集反應(yīng)法進(jìn)行了林麝LPEC的O血清型鑒定；采用PCR擴(kuò)增方法檢測(cè)了29株林麝LPEC包括磺胺類、喹諾酮類、β-內(nèi)酰胺酶類、氨基糖苷類和四環(huán)素類共五大類抗生素的20種耐藥基因；采用λ-Red同源重組方法構(gòu)建了林麝LPEC O78菌株的crl毒力基因缺失株(LPEC O78-crl~-),并比較分析了野生菌株LPEC O78與缺失株LPEC O78-crl~-在生化特性、生長(zhǎng)曲線、半數(shù)致死量(LD(_50))、病理組織切片以及紅細(xì)胞凝集能力等方面的基本生物學(xué)特性差異。最終得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1 林麝LPEC O血清型鑒定及部分耐藥基因的PCR檢測(cè)29株林麝LPEC中O血清型定型的有16株菌,分別屬于9個(gè)不同的血清型,其中O78為主要血清型,占定型菌株的43.75%(7/16)。耐藥基因的PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：29株林麝LPEC皆攜帶多種耐藥基因,20種耐藥基因中共檢測(cè)出15種耐藥基因,其中磺胺類的sul 1、sul2和sul 3基因,喹諾酮類的aac (6’)-Ib和qnrB基因,β-內(nèi)酰胺酶類的blaTEM和blaCTX-M基因,氨基糖苷類的aac(3)-lia ant(3)-la基因及四環(huán)素類的tet(B)基因具有較高檢出率,分別為：100%、96.55%、96.55%、100%、86.21%、100%、65.52%、100%、96.55%和58.62%。UPGMA建樹分析結(jié)果顯示：O血清型與耐藥基因的檢測(cè)情況沒有明顯的相關(guān)性。2 林麝LPEC O78 crl毒力基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究經(jīng)PCR擴(kuò)增測(cè)序鑒定,本實(shí)驗(yàn)所構(gòu)建的crl毒力基因缺失株LPEC O78 crl~-中crl基因已被成功敲除。通過生化實(shí)驗(yàn)以及生長(zhǎng)曲線的測(cè)定,證實(shí)crl毒力基因缺失不改變LPEC O78的基礎(chǔ)代謝,對(duì)其生長(zhǎng)速率影響不明顯。半數(shù)致死量(LD_(50))測(cè)定結(jié)果顯示：crl毒力基因缺失株LPEC O78-crl~-的LD_(50)為13.2×10~9CFU,野生株LPEC O78的LD_(50)為4.5×10~8CFU,與野生菌株LPEC O78相比crl毒力基因缺失株LPEC O78-crl~-毒力下降約7倍。觀察野生株和crl毒力基因缺失株對(duì)小白鼠攻毒的病理切片可以看到,crl毒力基因缺失株對(duì)小白鼠實(shí)質(zhì)器官的損害程度遠(yuǎn)小于野生菌株。另外,crl毒力基因缺失株LPEC O78-crl~-的細(xì)胞凝集效價(jià)為2~(-4),相比野生株LPEC O78的紅細(xì)胞凝集效價(jià)2~(-5)有所減低,說明crl毒力基因的缺失對(duì)林麝LPEC O78的紅細(xì)胞凝集能力有所降低。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：1249894