本文關(guān)鍵詞：家蠶BmYki-1基因鑒定與表達(dá)特征

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【摘要】：【目的】Hippo信號(hào)通路中的核心激酶通過磷酸化作用于轉(zhuǎn)錄共激活因子Yki來調(diào)控下游基因的表達(dá),在控制器官大小、細(xì)胞增殖與凋亡等方面起關(guān)鍵作用。家蠶(Bombyx mori)作為鱗翅目模式昆蟲,對(duì)其Hippo通路研究較少。論文旨在通過鑒定家蠶BmYki-1并對(duì)其序列信息和表達(dá)特征進(jìn)行分析,為進(jìn)一步研究中腸中Hippo信號(hào)通路提供基礎(chǔ),更好地了解Hippo信號(hào)通路在腸道穩(wěn)態(tài)維持及組織損傷修復(fù)方面的調(diào)控機(jī)制�！痉椒ā坷肗CBI數(shù)據(jù)庫及家蠶基因組數(shù)據(jù)庫等相關(guān)信息,以哺乳動(dòng)物和果蠅的Yki蛋白序列為依據(jù),對(duì)家蠶Yki基因的同源序列進(jìn)行鑒定;以家蠶大造品系為研究材料,利用PCR和c DNA末端快速克隆技術(shù)克隆獲得家蠶BmYki兩種可變剪切體的全長序列BmYki-1和BmYki-2,并基于生物信息學(xué)方法對(duì)兩種剪切體的基因序列特征及蛋白結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行分析;重點(diǎn)對(duì)BmYki-1在家蠶中腸組織中的功能進(jìn)行探索;利用半定量PCR檢測(cè)家蠶L5D3不同組織及中腸各個(gè)齡期BmYki-1表達(dá)情況;構(gòu)建BmYki-1過表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染家蠶胚胎細(xì)胞系對(duì)其進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測(cè)用博來霉素?fù)p傷的家蠶中腸中BmYki-1的表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】家蠶中存在兩種可變剪切形式的BmYki,分別為BmYki-1和BmYki-2,在家蠶基因組數(shù)據(jù)庫中對(duì)應(yīng)的注釋號(hào)分別為BGIBMGA0082-TA和BGIBMGA0081-TA,其開放閱讀框(ORF)分別為1 329和1 227 bp,分別編碼442和408個(gè)氨基酸,其蛋白質(zhì)分子量分別為48和44.1 k D,等電點(diǎn)分別為5.18和5.50,在139—171、220—252氨基酸處均各有1個(gè)WW結(jié)構(gòu)域。多物種進(jìn)化樹表明,家蠶BmYki-1與同為鱗翅目的昆蟲臍橙螟的親緣關(guān)系最近,與鞘翅目、膜翅目昆蟲較近,與雙翅目昆蟲較遠(yuǎn),而與脊椎動(dòng)物的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。結(jié)果顯示BmYki-1在家蠶中腸和絲腺中特異表達(dá),中腸不同齡期表達(dá)譜分析結(jié)構(gòu)顯示表達(dá)量從2眠開始上調(diào),在5齡的前中期表達(dá)水平較高。亞細(xì)胞定位試驗(yàn)表明BmYki-1蛋白在家蠶胚胎細(xì)胞系中主要存在于細(xì)胞核中,但在細(xì)胞質(zhì)中也有分布。與對(duì)照相比,用博來霉素?fù)p傷的家蠶中腸中BmYki-1的表達(dá)量顯著上調(diào)�！窘Y(jié)論】獲得了BmYki-1全長序列及時(shí)空表達(dá)特征,亞細(xì)胞定位BmYki-1蛋白主要在細(xì)胞核中,推測(cè)其在家蠶中腸細(xì)胞生長發(fā)育及損傷修復(fù)中起重要作用。
【作者單位】： 西南大學(xué)家蠶基因組生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(81201551) 中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金重點(diǎn)項(xiàng)目(XDJK2013B020);中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金學(xué)科團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2362015XK09) 本科生國家級(jí)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃(201310635006)
【分類號(hào)】：S881.2
【正文快照】： 0引言【研究意義】昆蟲的腸道組織按生理功能的不同一般劃分為前腸、中腸和后腸[1]。家蠶(Bombyx mori)幼蟲中腸占消化管全長的78%,不僅是消化食物、吸收營養(yǎng)的主要器官,也是一個(gè)重要免疫組織器官,是抵御病原入侵的第一道防線。同時(shí)在家蠶變態(tài)發(fā)育過程中,中腸反復(fù)經(jīng)歷著發(fā)育重

【相似文獻(xiàn)】

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