本文關鍵詞：家蠶BmYki-1基因鑒定與表達特征

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【摘要】：【目的】Hippo信號通路中的核心激酶通過磷酸化作用于轉(zhuǎn)錄共激活因子Yki來調(diào)控下游基因的表達,在控制器官大小、細胞增殖與凋亡等方面起關鍵作用。家蠶(Bombyx mori)作為鱗翅目模式昆蟲,對其Hippo通路研究較少。論文旨在通過鑒定家蠶BmYki-1并對其序列信息和表達特征進行分析,為進一步研究中腸中Hippo信號通路提供基礎,更好地了解Hippo信號通路在腸道穩(wěn)態(tài)維持及組織損傷修復方面的調(diào)控機制�！痉椒ā坷肗CBI數(shù)據(jù)庫及家蠶基因組數(shù)據(jù)庫等相關信息,以哺乳動物和果蠅的Yki蛋白序列為依據(jù),對家蠶Yki基因的同源序列進行鑒定;以家蠶大造品系為研究材料,利用PCR和c DNA末端快速克隆技術克隆獲得家蠶BmYki兩種可變剪切體的全長序列BmYki-1和BmYki-2,并基于生物信息學方法對兩種剪切體的基因序列特征及蛋白結(jié)構(gòu)特征進行分析;重點對BmYki-1在家蠶中腸組織中的功能進行探索;利用半定量PCR檢測家蠶L5D3不同組織及中腸各個齡期BmYki-1表達情況;構(gòu)建BmYki-1過表達載體并轉(zhuǎn)染家蠶胚胎細胞系對其進行亞細胞定位分析;實時熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測用博來霉素損傷的家蠶中腸中BmYki-1的表達情況�！窘Y(jié)果】家蠶中存在兩種可變剪切形式的BmYki,分別為BmYki-1和BmYki-2,在家蠶基因組數(shù)據(jù)庫中對應的注釋號分別為BGIBMGA0082-TA和BGIBMGA0081-TA,其開放閱讀框(ORF)分別為1 329和1 227 bp,分別編碼442和408個氨基酸,其蛋白質(zhì)分子量分別為48和44.1 k D,等電點分別為5.18和5.50,在139—171、220—252氨基酸處均各有1個WW結(jié)構(gòu)域。多物種進化樹表明,家蠶BmYki-1與同為鱗翅目的昆蟲臍橙螟的親緣關系最近,與鞘翅目、膜翅目昆蟲較近,與雙翅目昆蟲較遠,而與脊椎動物的親緣關系最遠。結(jié)果顯示BmYki-1在家蠶中腸和絲腺中特異表達,中腸不同齡期表達譜分析結(jié)構(gòu)顯示表達量從2眠開始上調(diào),在5齡的前中期表達水平較高。亞細胞定位試驗表明BmYki-1蛋白在家蠶胚胎細胞系中主要存在于細胞核中,但在細胞質(zhì)中也有分布。與對照相比,用博來霉素損傷的家蠶中腸中BmYki-1的表達量顯著上調(diào)�！窘Y(jié)論】獲得了BmYki-1全長序列及時空表達特征,亞細胞定位BmYki-1蛋白主要在細胞核中,推測其在家蠶中腸細胞生長發(fā)育及損傷修復中起重要作用。
【作者單位】： 西南大學家蠶基因組生物學國家重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金青年項目(81201551) 中央高�；究蒲袠I(yè)務費專項資金重點項目(XDJK2013B020);中央高�；究蒲袠I(yè)務費專項資金學科團隊項目(2362015XK09) 本科生國家級創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃(201310635006)
【分類號】：S881.2
【正文快照】： 0引言【研究意義】昆蟲的腸道組織按生理功能的不同一般劃分為前腸、中腸和后腸[1]。家蠶(Bombyx mori)幼蟲中腸占消化管全長的78%,不僅是消化食物、吸收營養(yǎng)的主要器官,也是一個重要免疫組織器官,是抵御病原入侵的第一道防線。同時在家蠶變態(tài)發(fā)育過程中,中腸反復經(jīng)歷著發(fā)育重

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