本文關(guān)鍵詞：QDPR基因表達(dá)變化對(duì)高糖環(huán)境下NRK-52E細(xì)胞的氧化應(yīng)激影響

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【摘要】：目的通過檢測(cè)高糖環(huán)境下各組細(xì)胞模型超氧陰離子(superoxide anion,O2-)及超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)的含量變化,探討醌型二氫生物喋呤還原酶(Quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)表達(dá)變化對(duì)高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞系NRK-52E細(xì)胞的氧化應(yīng)激影響。方法用本實(shí)驗(yàn)室制備的慢病毒構(gòu)建過表達(dá)QDPR基因、空載過表達(dá)病毒對(duì)照、敲低QDPR基因及敲低隨機(jī)序列病毒的NRK-52E細(xì)胞模型,分別給予NRK-52E細(xì)胞及制備好各組的細(xì)胞模型5.4mmol/L及30mmol/L的葡萄糖培養(yǎng)基,以模擬正常糖環(huán)境和高糖環(huán)境,并將所有細(xì)胞進(jìn)行以下分組:(1)NRK-52E對(duì)照組(NC組)(2)NRK-52E高糖對(duì)照組(NHG組)(3)空載過表達(dá)病毒對(duì)照組(LV-OCON組)(4)空載過表達(dá)病毒高糖對(duì)照組(LV-OCON-HG組)(5)QDPR基因過表達(dá)組(LVQDPR組)(6)QDPR基因過表達(dá)高糖組(LV-QDPR-HG組)(7)敲低隨機(jī)序列對(duì)照組(LV-SHCON組)(8)敲低隨機(jī)序列對(duì)照高糖組(LV-SHCON-HG組)(9)敲低QDPR基因組(LV-SHQDPR組)(10)敲低QDPR基因高糖組(LV-SHQDPR-HG組)。利用流式細(xì)胞術(shù)dihydroethidium方法檢測(cè)各組細(xì)胞O2-含量。用Western blot法檢測(cè)SOD1在各組表達(dá)水平。結(jié)果1高糖環(huán)境下NRK-52E細(xì)胞處于氧化應(yīng)激狀態(tài)。NRK-52E細(xì)胞高糖NHG組與正常葡萄糖對(duì)照NC組相比O2-含量增加(P0.05);SOD1表達(dá)下降(P0.05)。2利用慢病毒技術(shù)成功地構(gòu)建了過表達(dá)QDPR基因的NRK-52E細(xì)胞模型。高糖環(huán)境下,過表達(dá)QDPR基因的LV-QDPR-HG組與空載對(duì)照LV-OCONHG組相比細(xì)胞O2-含量降低(P0.001),SOD1表達(dá)下調(diào)(P0.01)。3利用慢病毒技術(shù)成功地構(gòu)建了敲低QDPR基因的NRK-52E細(xì)胞模型。高糖環(huán)境下,敲低QDPR基因的LV-SHQDPR-HG組與隨機(jī)序列對(duì)照組LV-SHCON-HG相比O2-含量升高(P0.05),SOD1表達(dá)無明顯變化(P0.05)。結(jié)論1 QDPR基因通過影響氧化應(yīng)激而影響糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展。2在高糖環(huán)境下,過表達(dá)QDPR基因能夠降低NRK-52E細(xì)胞的氧化應(yīng)激。3在高糖環(huán)境下,敲低QDPR基因能夠增加NRK-52E細(xì)胞的氧化應(yīng)激。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2

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