當(dāng)歸咖啡酸-O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因克隆和序列分析
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【摘要】:目的克隆當(dāng)歸Angelica sinensis咖啡酸-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(caffeic acid O-methyltransferases,COMT)編碼基因全長c DNA,并對序列進行生物信息學(xué)分析。方法提取當(dāng)歸葉片總RNA為c DNA合成模板,利用同源克隆結(jié)合c DNA末端快速擴增(RACE)技術(shù)克隆當(dāng)歸COMT全長c DNA,并利用NCBI、Ex PASy網(wǎng)站上的Blast N、Blast P、ORF Finder、Compute PI/Mw、Prot Scale、PROSITE、SWISS-MODEL等序列在線分析工具和MEGA、DNAMAN生物信息學(xué)軟件對序列進行分析。結(jié)果獲得COMT全長c DNA序列,并在Gen Bank注冊(登錄號KP188587)。序列分析表明,克隆的c DNA全長為1 436 bp,其中包括5’-UTR(76 bp)和3’-UTR(362 bp),含有1個1 098 bp的完整開放閱讀框(opening reading frame,ORF),編碼365個氨基酸的多肽鏈;預(yù)測蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量為40 230,理論等電點(p I)為5.43;無信號肽,具有典型的II型氧甲基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域SAM_OMT_II。結(jié)論首次克隆當(dāng)歸COMT基因全長c DNA,為當(dāng)歸COMT基因功能研究和當(dāng)歸阿魏酸生物合成與調(diào)控的機制研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】: 甘肅中醫(yī)藥大學(xué);
【基金】:國家自然科學(xué)基金資助項目(81260616,81060327)
【分類號】:S567.239
【正文快照】: 當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels是我國傳統(tǒng)常用中藥,味甘、辛,性溫,歸肝、心、脾經(jīng);具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便等功效[1]。近年來由于當(dāng)歸引種區(qū)域擴大,栽培面積和產(chǎn)量持續(xù)增加以及全球氣候變化等自然和人為因素的影響,當(dāng)歸藥材品質(zhì)面臨著巨大挑戰(zhàn),開展品質(zhì)形成相
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9 程抒R,
本文編號:1220332
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