本文關(guān)鍵詞：小麥農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因植株的穩(wěn)定獲得和檢測(cè)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

5期　　　　　　　　　　　　　葉興國(guó)等:小麥農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因植株的穩(wěn)定獲得和檢測(cè)　　　　　　　　　　　　　　473表3　不同小麥基因型轉(zhuǎn)化效果及目的基因的整合情況

Table3　Transformationefficiencyofdifferentexperimentsorgenotypesandintegrationoftargetgeneintowheatgenomics試驗(yàn)編號(hào)基因型

Exp1GenotypeBobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Jagger

揚(yáng)麥158

　Yangmai158

10揚(yáng)麥10號(hào)

　Yangmai10

123456789陽(yáng)性植株P(guān)ositiveplants263253400單拷貝整合植株P(guān)lantswithsinglecopyintegration142232300多拷貝整合植株P(guān)lantswithmultiplecopyintegration1210211轉(zhuǎn)化效率Transformationefficiency(%)0173119801750157112501701100單拷貝整合率Percentageofsinglecopy(%)501006616766167100100601006616775100--　4　2180　50100　　　　齡10～25d株[15],2個(gè)月以上的胚性愈

傷組織獲得了轉(zhuǎn)基因植株,利用培養(yǎng)1～25d的幼胚

或愈傷組織沒有獲得轉(zhuǎn)基因植株[16],而筆者利用預(yù)

培養(yǎng)4d的幼胚愈傷組織獲得了轉(zhuǎn)基因植株,利用

10～25d的胚性愈傷組織沒有獲得轉(zhuǎn)基因植株�？�

來,小麥外植體的生理狀態(tài)對(duì)農(nóng)桿菌侵染起著至關(guān)

重要的作用。事實(shí)上,產(chǎn)生胚性愈傷組織之前的幼胚

或小愈傷組織是比較理想的受體,被農(nóng)桿菌感染和

轉(zhuǎn)入外源DNA的細(xì)胞在選擇培養(yǎng)基上存活,進(jìn)而

產(chǎn)生胚性愈傷組織和再生植株,而胚性愈傷組織已

是一群分化了的細(xì)胞,各個(gè)器官已基本成形,在分化

培養(yǎng)基上3～5d即能產(chǎn)生綠芽。所以,筆者認(rèn)為用這

樣的愈傷組織作為受體難以轉(zhuǎn)化成功。此外,農(nóng)桿菌

轉(zhuǎn)化小麥具有很強(qiáng)的基因型特異性,Cheng等僅以

[15]Bobwhite為受體基因型獲得了轉(zhuǎn)基因植株,我們

除了Bobwhite以外,也以揚(yáng)麥10號(hào)為受體基因型

獲得了轉(zhuǎn)基因植株,拓寬了小麥農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的受體

基因型。篩選優(yōu)良的受體基因型是提高小麥農(nóng)桿菌

介導(dǎo)轉(zhuǎn)化效率的重要環(huán)節(jié)。

本研究首先利用npt??ELISA對(duì)抗性再生植

株進(jìn)行鑒定,呈陽(yáng)性反應(yīng)的植株移栽,假陽(yáng)性植株舍

棄,然后再利用PCR、Southernblot和葉片離體退

綠法對(duì)移栽的陽(yáng)性植株進(jìn)行鑒定,4種方法獲得的

檢測(cè)結(jié)果相互印證,非常一致。npt??ELISA檢測(cè)不

但具有簡(jiǎn)單、快速、可靠等優(yōu)點(diǎn),而且能較早淘汰假

陽(yáng)性植株,減輕移栽和分子檢測(cè)的工作量。另外,npt

??ELISA測(cè)定值的高低與目的基因在染色體組上

整合的拷貝數(shù)有一定關(guān)系,單拷貝整合植株的

三拷貝整合植株。所以,如果表達(dá)ELISA值高于二、上具有npt??基因,不但可以利用ELISA法對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行有效鑒定,而且還能判斷外源DNA的整合拷貝。References:[1]　VasilV,SrivastavaV,CastilloAM,etal.Rapidproduc2tionoftransgenicwheatplantsbydirectbombardmentofcul2turedimmatureembryos[J].Bio??Technology,1993,11:1153-1158.[2]　WeeksJT,AndersonOD,BlechlAE.Rapidproductionofmultipleindependentlinesoffertiletransgenicwheat(TriticumaestivumL.)[J].PlantPhysiol.1993,102:1077-1084.[3]　ChengZM,HeXY,ChenCZ,etal.Barleyyellowdwarfviruscoatproteingeneandtransgenicwheatplantsobtainedbypollentubepathway[J].ProgressinNaturalScience(Se2riesB),1994,4(2):235-240.[4]　ZengJZ,WangDJ,WuYQ,etal.Transgenicplantsob2tainedwithpollen2tubepathwaymethod[J].ScienceinChina(SeriesB),1994,37(3):319-326.[5]　ZhangXD,LiDM,XuWY,etal.Developmentoftrans2genicwheatbybiolisticbombardmenttransferringBastare2sistancegeneandnovelHMWgluteninsubunitgenes[J].ActaAgricultureBoreali2Sinica,1997,(1):133-136.(inChinese)張嘵東,李冬梅,徐文英,等.用基因槍將除草劑Basta抗性基因與小麥HMW谷蛋白亞基基因?qū)胄←湯@得轉(zhuǎn)基因植株[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào),1997,(1):133-136.[6]　BeckerD,BrettschnriderR,LorzH.Fertiletransgenicwheatfrommicrosprojectilebombardmentofscutellartissue[J].PlantJ.1994,5:299-307.[7]　BlechlAE,AndersonOD.Expressionofanovelhigh2molecular2weightgluteinsubunitgeneintransgenicwheat[J].NatureBiotechnology,1996,14(7):875-879.[8]　FredyA,VasilV,SrivastavaV,etal.Acceleratedproductionoftransgenicwheat(TriticumaestivumL.)plants[J].PlantCellReports,1996,16:12-17.[

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