本文關鍵詞：青�；【鸁晒馑孛富虍愒幢磉_優(yōu)化及其轉座載體構建

  更多相關文章： 青�；【� 熒光素酶 生物發(fā)光 異源表達 轉座

【摘要】：熒光素酶是發(fā)光菌在生物發(fā)光過程中起催化作用的關鍵因子,由還原性黃素單核甘酸(FMNH2)、氧氣、脂肪醛發(fā)生生化反應,生成脂肪酸、水和490 nm的藍綠光。當前成像技術和以熒光素酶為基礎的生物發(fā)光菌株結合的方法提供了一個靈敏、簡單而且非致病性的檢測手段,熒光素酶的研究成為科研工作中的一個熱點。生物發(fā)光標記以其可視化、便捷、快速、靈敏,可用于活體研究等諸多優(yōu)點越來越多地應用于科學研究中。本次研究對構建成功的帶有青�；【鸁晒馑孛富騦uxAB的重組質粒大腸桿菌Top10表達條件優(yōu)化,為進一步在益生菌等食品微生物中的應用奠定了基礎,而且為后續(xù)酶學性質的研究和酶的分子修飾提供參考。試驗后半部分構建的帶有青�；【鸁晒馑孛富騦uxAB的轉座載體的重組菌株Z10,利用轉座發(fā)生后熒光素酶可以穩(wěn)定高效表達這一特點,為發(fā)光菌對環(huán)境、食品等領域的檢測提供了一個原始材料。具體研究結果如下:(1)核酸電泳驗證和蛋白表達驗證表明,重組質粒已經導入大腸桿菌并且熒光素酶已經表達。(2)表達條件進行優(yōu)化結果,單因素結果表明:培養(yǎng)基初始pH為6.0,癸醛終濃度為1.25‰(v/v),接種量為1%,IPTG濃度為0.1 mmol/L,裝液量為50 mL/150mL,溫度為37℃重組菌的發(fā)光度最大,即熒光素酶表達量最大。(3)正交試驗表明:構建的重組發(fā)光性細菌發(fā)光影響程度從大到小依次是接種量、溫度、初始pH、IPTG誘導濃度,而且pH為6.0,IPTG濃度為0.08 mmol/L,接種量為1.2%,溫度為36℃表達情況最好,發(fā)光度達到1262.7,并且正交試驗結果與單因素最優(yōu)組合結果相比,發(fā)光強度更大,說明正交試驗的條件是熒光素酶表達的最優(yōu)條件。(4)轉座載體的酶切驗證和測序表明,已經成功構建帶有青�；【鸁晒馑孛富虻霓D座載體,并將其保存于大腸桿菌Top10。
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：TS201.3

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本文編號：1195624