發(fā)布時(shí)間：2017-11-12 22:18

  本文關(guān)鍵詞：綠色木霉纖維二糖水解酶基因的克隆及其在乳酸菌中的表達(dá)與鑒定

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【摘要】：采用乳酸菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行綠色木霉纖維二糖水解酶基因cbhⅡ的表達(dá)研究。參照Gen Bank上發(fā)表的綠色木霉(Trichoderma viride)cbhⅡ基因(Gen Bank登錄號:M55080)設(shè)計(jì)引物并通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)克隆獲得其c DNA序列長1 441 bp。為了達(dá)到表達(dá)分泌該酶的目的,在其基因上游序列前添加了大小為80 bp的信號肽序列。進(jìn)一步通過生物信息學(xué)方法將密碼子按照乳酸菌的偏好性進(jìn)行了優(yōu)化,通過全基因合成獲得了優(yōu)化后的cbhⅡ基因。將該基因與穿梭表達(dá)載體p MG36e連接,構(gòu)建原核表達(dá)載體p MG36e-S-cbhⅡ;利用電轉(zhuǎn)化方法將其轉(zhuǎn)入乳酸乳球菌NZ3900感受態(tài)細(xì)胞中構(gòu)建重組乳酸菌,純化的重組菌蛋白通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測,得到一條約為53 k D的目的蛋白條帶,與預(yù)期大小相符;利用3,5-二硝基水楊酸法測定培養(yǎng)基上清液中水解纖維素酶的活力達(dá)到16.7 U/m L,菌體裂解液上清液和菌體沉淀幾乎沒有酶活力。結(jié)果表明,纖維二糖水解酶基因信號肽序列被乳酸乳球菌正確識別,并成功實(shí)現(xiàn)了胞外表達(dá)。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院;國家大豆產(chǎn)業(yè)技術(shù)研發(fā)中心加工研究室;
【基金】：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(大豆)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-04) 吉林省重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(20150204036NY)
【分類號】：Q78
【正文快照】： 引文格式:王翠艷,王玉華,樸春紅,等.綠色木霉纖維二糖水解酶基因的克隆及其在乳酸菌中的表達(dá)與鑒定[J].食品科學(xué),2016,37(19):141-146.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201619024.http://www.spkx.net.cnWANG Cuiyan,WANG Yuhua,PIAO Chunhong,et al.Cloning,expression and identi

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本文編號：1177863