本文關(guān)鍵詞：分枝桿菌表達質(zhì)粒的快速構(gòu)建及ClpC2基因功能初步研究

  更多相關(guān)文章： FspEⅠ內(nèi)切酶 恥垢分枝桿菌 Clp C基因 免疫原性

【摘要】：目的通過一種不受到序列限制、酶切連接反應(yīng)一步進行的分子克隆方法,構(gòu)建分枝桿菌Clp C2重組表達質(zhì)粒,檢測其在恥垢分枝桿菌中的蛋白表達并對其功能進行初步探討。方法利用識別甲基化位點的內(nèi)切酶Fsp EⅠ進行一步法酶切、連接反應(yīng),構(gòu)建重組質(zhì)粒PMV261(+)-Clp C2。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入恥垢分枝桿菌,利用SDS-PAGE和Western blot檢測Clp C2基因在恥垢分枝桿菌中的表達以及氧化應(yīng)激、酸應(yīng)激對其功能進行初步探討。結(jié)果利用Fsp EⅠ快速構(gòu)建了分枝桿菌表達質(zhì)粒Clp C2,將其成功電轉(zhuǎn)至恥垢分枝桿菌中,SDS-PAGEA和Western blot檢測其蛋白的表達,His單抗和兔多抗均能檢測到目的條帶,Mr大小27 570。氧化應(yīng)激及酸應(yīng)激實驗表明Clp C2重組恥垢分枝桿菌與空載恥垢分枝桿菌在對抗應(yīng)激方面無明顯差異。結(jié)論成功構(gòu)建了一種不受序列限制的分子克隆方法以及分枝桿菌Clp C2重組表達質(zhì)粒,Western blot表明其具有一定的免疫原性,氧化應(yīng)激及酸應(yīng)激表明Clp C2重組恥垢分枝桿菌對抗應(yīng)激方面無明顯改變,為進一步深入研究Clp C2基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心病原生物學(xué)教研室;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【基金】：重慶市教委科學(xué)技術(shù)研究項目(KJ1500203)
【分類號】：R392
【正文快照】： 結(jié)核病(Tuberculosis,TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的世界性疾病,目前仍然是影響人體健康的最重要傳染性疾病之一[1]。全球結(jié)核攜帶者約為總?cè)藬?shù)的1/3,每年新 發(fā)結(jié)核病例約900萬人,將近200萬人死于結(jié)核病。而我國也是世界上22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家

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