本文關(guān)鍵詞：新型GH5家族β-甘露聚糖酶的基因挖掘及表達(dá)鑒定

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【摘要】：為了獲得性能優(yōu)良的新型β-甘露聚糖酶,本研究采用基因挖掘技術(shù)從米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40基因組中挖掘到了2個假定的新型GH5家族β-甘露聚糖酶基因,分別命名為Aoman5A和Aoman5B。對這兩條序列做了相關(guān)的生物信息學(xué)分析,同時借助p PIC9KM質(zhì)粒將兩個酶的成熟肽編碼基因在Pichia pastoris GS115中實現(xiàn)了表達(dá),并對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了純化和鑒定。生物信息學(xué)分析的結(jié)果表明Ao Man5A含有20個氨基酸殘基的信號肽,而Ao Man5B含有21個氨基酸殘基的信號肽和12個氨基酸殘基的前導(dǎo)肽;序列比對的結(jié)果顯示兩個酶與目前已報道的序列最高的同源性分別為68%和79%,且Ao Man5A的N端還攜帶有一個1家族的CBM;三維結(jié)構(gòu)預(yù)測的結(jié)果顯示,兩者均符合(α/β)8的TIM-桶狀結(jié)構(gòu)。表達(dá)鑒定的結(jié)果表明,在同樣表達(dá)條件下,re Ao Man5A和re Ao Man5B上清液的酶活力分別為2.9、12.5 IU/m L;純化后它們的酶比活力分別為8.3、104.2 IU/mg,前者的最適溫度為35℃,而后者的最適溫度為50℃,p H值特性的測定結(jié)果表明這兩種酶均為酸性酶。硫酸-苯酚法測得re Ao Man5A和re Ao Man5B的糖含量分別為25.4%和12.6%,表明這兩種重組酶均經(jīng)過了糖基化修飾。本研究獲得了兩種新型的β-甘露聚糖酶,比較分析了它們的序列特征,并實現(xiàn)了它們的異源表達(dá),為β-甘露聚糖酶的進(jìn)一步研究及應(yīng)用奠定了堅實的基礎(chǔ),也為其他新型酶的基因挖掘提供了可資借鑒的經(jīng)驗。
【作者單位】： 南陽師范學(xué)院昆蟲生物反應(yīng)器河南省工程實驗室;南陽師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;蓬萊市市場監(jiān)督管理局;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項目(31401989) 河南省高等學(xué)校重點科研計劃項目(15A416008)
【分類號】：Q55;Q78
【正文快照】： β-甘露聚糖酶是一類能夠水解甘露聚糖的酶的總稱,近年來研究較多的主要是β-1,4-內(nèi)切甘露聚糖酶[1-2]。基于序列同源性及疏水簇分析,β-甘露聚糖酶可以被歸為糖苷水解酶(glycoside hydrolase,GH)第5、26和113家族,而報道最多、研究最廣的主要是GH5家族的β-甘露聚糖酶[3-4]。

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1162064