本文關(guān)鍵詞：利用RNAi抑制cre1基因轉(zhuǎn)錄提高里氏木霉表達(dá)纖維素酶

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【摘要】：本研究采用RNA干擾技術(shù)(RNAi)對里氏木霉主要的轉(zhuǎn)錄抑制因子cre1基因的表達(dá)進(jìn)行抑制,以期提高里氏木霉生產(chǎn)纖維素酶的能力。通過PCR,從里氏木霉的基因組中擴(kuò)增得到cbh1啟動子、反向的cre1基因片段(568~963 bp)、正向的cre1基因片段(655~961 bp)和cbh2終止子,利用DNA assembler方法將這些基因連接到pRS424質(zhì)粒上,構(gòu)建成p Cre1-i質(zhì)粒。再將RNAi盒分作兩個片段擴(kuò)增,同時轉(zhuǎn)化里氏木霉并通過PCR鑒定陽性轉(zhuǎn)化子。搖瓶發(fā)酵顯示其中一株轉(zhuǎn)化子在纖維素誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)4.5 d后,其纖維素酶的濾紙酶活、內(nèi)切葡聚糖酶活和CBHI酶活為0.67、3.70和0.46 U/m L,較出發(fā)菌株分別提高了1.3、1.8和5.6倍。通過實(shí)時熒光RT-PCR檢測,發(fā)現(xiàn)該轉(zhuǎn)化子中cre1基因的轉(zhuǎn)錄水平比出發(fā)菌株降低了43%。
【作者單位】： 山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(31400067) 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年英才計(jì)劃
【分類號】：TQ920.1
【正文快照】： 纖維素酶作為自然界中數(shù)量最大的可再生資源,在制酒、醬油釀造、飲料加工等食品行業(yè)有廣泛的應(yīng)用價值[1]。目前,報(bào)道的主要產(chǎn)纖維素酶的菌株多為真菌[2]。其中,里氏木霉因其表達(dá)能力強(qiáng)(工業(yè)上,經(jīng)改造后的里氏木霉,其產(chǎn)纖維素酶的產(chǎn)量可達(dá)到100 g/L以上[3])、易于培養(yǎng)和符合“

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳士華;薛珍;姚金杰;吳興泉;;里氏木霉纖維二糖水解酶Ⅱ的生物信息學(xué)研究[J];河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年04期

2 柳常青;許琳;歐陽嘉;董鄭偉;嚴(yán)明;;不同碳源條件下里氏木霉纖維降解酶的蛋白組解析[J];南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年01期

3 張曉p，

本文編號：1156685