發(fā)布時間：2017-11-07 21:14

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)抗菌肽PR39基因小鼠的制備及研究

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【摘要】：抗菌肽作為動物體先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分,具有廣譜抗細(xì)菌、真菌、病毒等病原微生物及抗腫瘤的作用。它與抗生素相比,具有易降解,不易導(dǎo)致藥物殘留,且不易使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)勢,因此有望成為抗生素新的替代品�？咕哪壳耙话阕鳛轱暳咸砑觿┑男问綉�(yīng)用于畜牧行業(yè),但它的活性在生產(chǎn)、儲存和運輸過程中容易下降,并且它在飼料中的添加增加了養(yǎng)殖成本。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù),使動物體表達(dá)內(nèi)源抗菌肽來提高其抗病力是解決上述問題的一條有效途徑。本研究選用豬源抗菌肽PR39(proline-arginine-rich 39-amino acid peptide),構(gòu)建了PR39表達(dá)載體pCMS-EGFP-PR39,在體外培養(yǎng)細(xì)胞中驗證了其表達(dá)和功能,經(jīng)原核顯微注射法,制備了8只F0代轉(zhuǎn)PR39基因小鼠,分析了EGFP標(biāo)記基因和PR39基因在轉(zhuǎn)基因小鼠中的表達(dá)和遺傳情況,并通過人工感染豬胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus P1europeumoniae/APP),比較了轉(zhuǎn)PR39基因小鼠與其同窩的野生型小鼠之間的抑菌能力差異。主要結(jié)果如下:(1)pCMS-EGFP-PR39載體能在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中表達(dá)出能顯著抑制大腸桿菌生長的抗菌肽PR39。(2)PR39基因在轉(zhuǎn)基因小鼠的多個組織中都有表達(dá),并能穩(wěn)定遺傳至后代。轉(zhuǎn)PR39基因小鼠的生長速度顯著高于同窩非轉(zhuǎn)基因小鼠。(3)豬胸膜肺炎放線桿菌感染小鼠試驗結(jié)果顯示感染后5~24h,轉(zhuǎn)基因小鼠組死亡率低于非轉(zhuǎn)基因小鼠組,其中在9h、13h轉(zhuǎn)基因小鼠組死亡率顯著低于非轉(zhuǎn)基因小鼠組,表明PR39可增強轉(zhuǎn)基因小鼠的抗菌能力,延緩了其死亡時間,降低了其死亡率。(3)豬胸膜肺炎放線桿菌感染5h后存活轉(zhuǎn)基因小鼠各組織細(xì)菌含量顯著低于對照非轉(zhuǎn)基因小鼠,且組織病理癥狀比對照小鼠輕微。(4)豬胸膜肺炎放線桿菌感染后在5-17h死亡的轉(zhuǎn)基因小鼠各組織細(xì)菌含量顯著高于對照小鼠,而組織病理癥狀較對照小鼠輕微,表明轉(zhuǎn)PR39基因小鼠具有更強的細(xì)菌耐受力,需要更高劑量的細(xì)菌才能使其死亡。綜上所述,本研究證明了轉(zhuǎn)基因表達(dá)PR39可顯著增強轉(zhuǎn)基因小鼠對細(xì)菌的抵抗力,這為未來培育具有良好抗病性能的轉(zhuǎn)PR39基因豬提供了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q789;S852

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本文編號：1154147