本文關(guān)鍵詞：利用鎖核酸化學(xué)偶聯(lián)FokⅠ核酸酶靶向切割HBV基因的體外實(shí)驗(yàn)

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【摘要】：乙肝病毒(HBV)是有缺口的雙鏈DNA病毒,侵入人體肝細(xì)胞后形成共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(ccc DNA)持續(xù)復(fù)制,并在逆轉(zhuǎn)錄過程中隨機(jī)整合入宿主基因組。慢性乙型肝炎感染者平均每個(gè)細(xì)胞中含有33個(gè)ccc DNA拷貝,半衰期長達(dá)35~57 d,很難從體內(nèi)徹底清除。利用鎖核酸抑制HBV轉(zhuǎn)錄,是乙肝治療的新策略。此外,利用基因組編輯技術(shù)靶向切割HBV基因組,有望從源頭治愈乙型肝炎。基于鎖核酸與雙鏈DNA形成三股螺旋的能力、抵御核酸酶及聚合酶的穩(wěn)定性以及對(duì)單堿基錯(cuò)配的敏感性,本研究以靶向切割乙型肝炎病毒為例,設(shè)計(jì)構(gòu)建鎖核酸修飾的寡核苷酸作為DNA結(jié)合域,有效增強(qiáng)對(duì)靶基因的特異性識(shí)別;同時(shí)利用FokⅠ核酸酶分子量小、二聚化時(shí)才具有酶活等特點(diǎn),設(shè)計(jì)構(gòu)建FokⅠ切割域二聚體重組蛋白作為DNA切割域;進(jìn)而通過雙功能交聯(lián)劑GMBS,建立了5′端氨基(-NH2)修飾的鎖核酸與N端巰基(-SH)修飾的FokⅠ核酸酶定向化學(xué)偶聯(lián)的方法,并在體外驗(yàn)證了新型工具對(duì)HBV基因的靶向切割。該方法為此后在體內(nèi)進(jìn)行高特異性、無整合風(fēng)險(xiǎn)的抗病毒基因治療提供了全新的技術(shù)思路。
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;上海近岸科技有限公司;生工生物工程(上海)股份有限公司;
【分類號(hào)】：R373.21;Q78
【正文快照】： 乙型肝炎是由乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)引起的肝臟炎性病變,可轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌。全球約有2.4億人是慢性乙型肝炎感染者,我國屬乙型肝炎高發(fā)區(qū),一般人群HBs Ag陽性率為9.09%。HBV基因組全長3.2 kb,在侵入細(xì)胞核后形成共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(Covalently closed circular DNA

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 達(dá)飛;侯征;孟靜茹;賈敏;羅曉星;;反義鎖核酸阻斷耐甲氧西林金黃色葡萄球菌agr群體感應(yīng)系統(tǒng)[J];中國生物工程雜志;2013年05期

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4 胡玉琳;�？∑�;王峰;;脫氧核酶及鎖核酸核酶對(duì)2.2.15細(xì)胞中HBsAg和HBeAg表達(dá)的抑制作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年02期

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本文編號(hào)：1145368