發(fā)布時(shí)間：2017-11-04 09:18

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  更多相關(guān)文章： 紫花苜蓿 MsF-box基因 農(nóng)桿菌介導(dǎo) 遺傳轉(zhuǎn)化

【摘要】：低溫對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育不利,嚴(yán)重影響農(nóng)作物的產(chǎn)量,是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中常見的限制因子。F-box是一類含有F-box基序(motif)在泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)水解過(guò)程中具有底物識(shí)別特性的蛋白質(zhì)。F-box蛋白在逆境脅迫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。本研究從紫花苜蓿中克隆得到MsF-box基因,將其連至表達(dá)載體pCBM,并對(duì)模式植物擬南芥和煙草進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,為研究F-box基因的功能奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.MsF-box基因的克隆與生物信息學(xué)分析利用RT-PCR的方法從紫花苜蓿中克隆得到了MsF-box基因的全長(zhǎng)cDNA,MsF-box基因的全長(zhǎng)為1422 bp,該基因編碼473個(gè)氨基酸。該蛋白有一個(gè)F-box基序,以及6個(gè)LRR結(jié)構(gòu)域。將其氨基酸序列在NCBI中Blast分析,發(fā)現(xiàn)與MtF-box(蒺藜苜蓿,XP_003626345)相比,氨基酸具有同源性,相似性為96%。2.MsF-box基因的植物表達(dá)載體構(gòu)建構(gòu)建MsF-box基因的植物表達(dá)載體pCBM-MsF-box。含有花椰菜花葉病毒(CaMV)35S啟動(dòng)子和草丁膦篩選標(biāo)記基因bar。3.MsF-box基因?qū)χ参锏倪z傳轉(zhuǎn)化(1)MsF-box基因?qū)煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化將pCBM-MsF-box質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105中,采取農(nóng)桿菌侵染葉盤法完成對(duì)煙草的遺傳轉(zhuǎn)化。將煙草葉盤置于添加1.1 mg/L草丁膦的篩選培養(yǎng)基上,進(jìn)行篩選。待長(zhǎng)出不定芽后,將不定芽移置生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根,獲得抗性植株。(2)MsF-box基因?qū)M南芥的遺傳轉(zhuǎn)化將pCBM-MsF-box質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105中,采用農(nóng)桿菌侵染花序法完成對(duì)擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化,待果莢成熟后收獲種子。得到的擬南芥種子置于40μmol/L草丁膦的篩選培養(yǎng)基上,進(jìn)行篩選,獲得抗性幼苗。移抗性幼苗于蛭石中,收取種子。4.轉(zhuǎn)MsF-box基因植物的分子檢測(cè)和抗寒性分析經(jīng)MsF-box基因內(nèi)部引物和35S::Bar引物PCR鑒定獲得煙草陽(yáng)性苗9株,擬南芥陽(yáng)性苗20株。對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草(L8和L35)和擬南芥(L8)進(jìn)行冷脅迫處理,冷脅迫下,與野生型相比,轉(zhuǎn)MsF-box基因株系表現(xiàn)出更強(qiáng)的抗寒能力。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：Q943.2;S541.9

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 叢慶;紫花苜蓿抗寒基因MsF-box的克隆和功能研究[D];哈爾濱師范大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1138785