本文關(guān)鍵詞：小反芻獸疫全基因序列分析與核衣殼蛋白在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 小反芻獸疫 真核表達(dá) 疫苗 N基因 感染性克隆

【摘要】：小反芻獸疫(Pest des petits ruminants,PPR)是由小反芻獸疫病毒(Pest des petits ruminants virus,PPRV)引起的烈性傳染病,其病毒主要危害山羊、綿羊等小反芻獸,以突然發(fā)病、高熱稽留、口瘡、流鼻涕、腹瀉等主要病癥,因其發(fā)病率和死亡率高,傳播速度快,被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(The World Organisation for Animal Health,OIE)列為A類烈性重大傳染病之一。小反芻獸疫病毒于2007年7月在我國西藏首次發(fā)現(xiàn),相繼在2013年新疆伊犁大爆發(fā),引起大批量的山羊、綿羊死亡,給養(yǎng)殖戶帶來巨大損失。隨后在我國20多個(gè)省、市大量流行、傳播。各地的有關(guān)部門也重視了該病毒的危害性,積極采取措施預(yù)防。筆者于2014年春季在廣東省某羊場送檢的樣本中首次檢測到了小反芻獸疫病毒,并把該毒株命名為CH/GDDG/2014。本研究對其全基因組特征、N基因抗原活性等進(jìn)行了研究,有助于了解小反芻獸疫病毒的分子流行病學(xué),也為小反芻獸疫病毒的診斷研究奠定基礎(chǔ)。本研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.本研究利用RT-PCR分11段重疊cDNA擴(kuò)增小反芻獸疫病毒基因全長序列獲得PPRV全基因組,并命名為CH/GDDG/2014株,經(jīng)序列測定與GenBank中收錄的23條小反芻獸疫參考毒株的序列進(jìn)行核苷酸同源性分析,構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果顯示CH/GDDG/2014株基因組含有15954個(gè)核苷酸,獲得的全長序列比國外分離的毒株要多6個(gè)核苷酸(TCCCTC),由于這6個(gè)核苷酸的插入可能導(dǎo)致病毒滴度降低,對細(xì)胞的培養(yǎng)造成一定的困難。該基因組包括六個(gè)開放閱讀框(ORFs)分別編碼核衣殼蛋白,磷蛋白,基質(zhì)蛋白,融合蛋白,血凝素,和大聚合酶蛋白。與參考株之間的核苷酸同源性為87.2%?99.8%,其中發(fā)現(xiàn)CH/GDDG/2014株與China/XJYL/2013株同源性最高(99.8%),與KN5/2011同源性最低(87.2%)。小反芻獸疫病毒CH/GDDG/2014株與國內(nèi)近2年的小反芻獸疫病毒毒株均在系統(tǒng)進(jìn)化樹上處于同一分支,而與國外毒株處于不同分支。進(jìn)一步表明目前國內(nèi)流行的小反芻病毒親緣關(guān)系較近,且主要以IV系流行。構(gòu)建了PPRV的全長cDNA為拯救PPRV奠定了基礎(chǔ)。2.本研究成功構(gòu)建了小反芻獸疫N基因的重組穿梭質(zhì)粒pFastBac-PPRV-N,經(jīng)測序正確,轉(zhuǎn)化到DH10Bac大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)過藍(lán)白斑篩選轉(zhuǎn)座后獲得重組桿狀病毒桿粒Bacmid-PPRV-N,轉(zhuǎn)染生長良好的Sf9細(xì)胞,獲取重組桿狀病毒。通SDS-PAGE和WB鑒定N的蛋白的表達(dá),且鑒定的條帶與預(yù)期的相符。
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曾江勇;;淺議小反芻獸疫[J];西藏科技;2008年08期

2 董浩;段小波;;小反芻獸疫分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年10期

3 本刊綜合;;直擊小反芻獸疫[J];科技致富向?qū)?2014年16期

4 范仲鑫;王昌建;汪洪冰;黃建龍;朱春霞;;小反芻獸疫的防控[J];湖南畜牧獸醫(yī);2014年03期

5 陳桂華;;洞口縣山羊感染小反芻獸疫的調(diào)查與體會(huì)[J];湖南畜牧獸醫(yī);2014年03期

6 陶春愛;邱文英;李剛;田康樂;;納米金標(biāo)記核酸探針檢測小反芻獸疫病毒核酸的研究[J];中國生物工程雜志;2012年07期

7 蔡冬冬;李金海;邢坤;裴超信;陳斌;;小反芻獸疫概述[J];四川畜牧獸醫(yī);2014年05期

8 白吉;劉玉芳;;小反芻獸疫臨床癥狀與診斷技術(shù)[J];西藏科技;2008年04期

9 劉拂曉;柳增善;王志亮;;從消滅牛瘟分析全球根除小反芻獸疫的可行性[J];病毒學(xué)報(bào);2012年01期

10 米瑪次仁(小);;小反芻獸疫(PPR)的流行診斷防控及對阿里地區(qū)動(dòng)物防疫工作的啟發(fā)[J];西藏科技;2011年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 秦曉光;金寧一;沈國順;夏學(xué)功;;小反芻獸疫的研究進(jìn)展[A];第六屆全國會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

2 秦曉光;金寧一;沈國順;夏學(xué)功;;小反芻獸疫的研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

3 史耀旭;張亮;蘆芝川;衛(wèi)廣森;;小反芻獸疫的研究進(jìn)展[A];首屆中國獸藥大會(huì)——獸醫(yī)生物制品學(xué)、獸醫(yī)微生物學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文集（2008）[C];2008年

4 王玉紅;支海兵;黃炯;朱剛;;小反芻獸疫活疫苗免疫血清抗體效價(jià)測定方法的比較[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊）[C];2009年

5 王樂元;次真;吳國珍;安榮祥;周明;多杰熱登;蔡斌;;中國西藏小反芻獸疫防控報(bào)告[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集(上冊)[C];2010年

6 李震;董世娟;曾江勇;朱于敏;色珠;;由麻疹病毒思考小反芻獸疫的問題[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

7 尹尚蓮;艾軍;葉玲玲;董俊;楊曉花;張其艷;周曉黎;;小反芻獸疫的診斷方法和疫苗研究現(xiàn)狀[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

8 王志亮;謝仲倫;楊楠;吳曉東;包靜月;劉雨田;張維;張永強(qiáng);劉春菊;索朗次仁;吳國珍;安榮祥;;我國西藏地區(qū)小反芻獸疫的發(fā)生、流行與防控對策[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

9 王志亮;;我國小反芻獸疫的發(fā)現(xiàn)及其在西藏地區(qū)自然演化規(guī)律的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊）[C];2009年

10 李靜;;淺談羊小反芻獸疫[A];“創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)、生態(tài)養(yǎng)殖、轉(zhuǎn)型發(fā)展”論文集[C];2014年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邢臺市獸醫(yī)院 邢蘭君 楊立凡;如何區(qū)分小反芻獸疫[N];河北科技報(bào);2014年

2 邢臺市獸醫(yī)院 邢蘭君 楊立凡;別忽視小反芻獸疫的防控[N];河北農(nóng)民報(bào);2014年

3 獸醫(yī)專家 張守印;羊患小反芻獸疫有何表現(xiàn)[N];吉林農(nóng)村報(bào);2014年

4 本報(bào)記者 崔京華;周邊國家暴發(fā)小反芻獸疫[N];農(nóng)民日報(bào);2003年

5 馬艷軍;我區(qū)嚴(yán)防羊小反芻獸疫疫情[N];內(nèi)蒙古日報(bào)(漢);2007年

6 龍新;西藏日土縣發(fā)生小反芻獸疫疫情[N];農(nóng)民日報(bào);2010年

7 黃涵;世界動(dòng)物衛(wèi)生組織發(fā)起小反芻獸疫防治試點(diǎn)項(xiàng)目[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2012年

8 孟文;小反芻獸疫防控知識[N];農(nóng)民日報(bào);2014年

9 記者 邊文寧;通報(bào)我市小反芻獸疫疫情處置情況[N];巴彥淖爾日報(bào)(漢);2014年

10 楚雄州重大動(dòng)物疫病防治指揮部辦公室;我州全力阻擊小反芻獸疫情[N];楚雄日報(bào)(漢);2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 秦峻嶺;基于犬2型腺病毒和1型腺相關(guān)病毒載體的小反芻獸疫重組疫苗的研究[D];吉林大學(xué);2013年

2 王秋霞;小反芻獸疫病毒樣顆粒的裝配與釋放研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

3 蒙學(xué)蓮;小反芻獸疫病毒血凝素蛋白及其受體的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 欒志舫;小反芻獸疫抗體及抗原診斷方法的初步建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

2 武婭楠;內(nèi)蒙古地區(qū)小反芻獸疫免疫抗體及病原學(xué)檢測[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 李小鵬;小反芻獸疫全基因序列分析與核衣殼蛋白在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 毛立;小反芻獸疫檢測方法的建立和初步應(yīng)用[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 田曉靈;小反芻獸疫基因免疫的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 陸則基;小反芻獸疫間接ELISA檢測方法的優(yōu)化及其應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2009年

7 朱學(xué)亮;小反芻獸疫核酸疫苗的初步研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 邱文英;小反芻獸疫病毒抗體、抗原免疫學(xué)檢測方法和納米金核酸檢測方法的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

9 王春霞;一起小反芻獸疫的診斷及病原分離鑒定[D];吉林大學(xué);2015年

10 吳華偉;小反芻獸疫緩釋微囊疫苗制備技術(shù)研究[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2010年

，

本文編號：1137876