本文關(guān)鍵詞：重組豬細(xì)小病毒VP2基因的豬偽狂犬病毒rPRV-VP2株的構(gòu)建及純化

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【摘要】：參考GenBank中登錄的豬細(xì)小病毒(PPV)(M38367.1)基因序列,設(shè)計(jì)1對(duì)可以擴(kuò)增出約1.6kb PPV VP2基因片段的特異性引物,上、下游引物的5′端均引入BamHⅠ酶切位點(diǎn),PCR擴(kuò)增得到VP2目的片段后,連接到pMD18-T載體中得到重組質(zhì)粒pMD-VP2。取本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的含綠色熒光蛋白標(biāo)記基因的偽狂犬病毒(PRV)通用轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pG和構(gòu)建好的pMD-VP2質(zhì)粒,用BamHⅠ對(duì)質(zhì)粒pG和pMD-VP2進(jìn)行酶切,然后用CIAP對(duì)酶切產(chǎn)物進(jìn)行去磷酸化處理,純化回收后將VP2基因插入pG質(zhì)粒中獲得重組偽狂犬病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pGVP2。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將PRV HB-98株全基因組與質(zhì)粒pGVP2共轉(zhuǎn)染ST細(xì)胞,得到攜帶有PPV VP2外源抗原基因和綠色熒光蛋白標(biāo)記基因的重組偽狂犬病毒rPRV-VP2株。結(jié)合VP2基因PCR擴(kuò)增和綠色熒光觀察,經(jīng)5輪病毒空斑純化得到了純化的重組病毒rPRV-VP2株。
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)鄭州市豬重大疾病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;鄭州師范學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： PRV 豬細(xì)小病毒 VP基因 重組
【基金】：河南省重大科技專項(xiàng)資助項(xiàng)目(111100110300)
【分類號(hào)】：S852.65
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:chhy927@163.com豬細(xì)小病毒(porcine parvovirus,PPV)屬于細(xì)小病毒科、細(xì)小病毒屬成員[1],是引發(fā)豬繁殖障礙的重要病原體之一,該病原體主要引起母豬尤其是初產(chǎn)妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎、而母豬本身往往無明顯臨床癥狀。本病在世界范圍

【參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1133519