本文關(guān)鍵詞：新疆多浪羊IL-1β基因原核表達載體的構(gòu)建與表達

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【摘要】：【目的】構(gòu)建新疆多浪羊IL-1β基因編碼區(qū)的原核表達載體,在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達,為進一步研究IL-1β蛋白的結(jié)構(gòu)功能奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā繌暮|(zhì)粒pMD-18T-IL-1β的大腸桿菌DH5α中獲取IL-1β基因,與pET-28b質(zhì)粒DNA連接,構(gòu)建原核表達載體pET-28b-IL-1β。先將其轉(zhuǎn)化到克隆載體E.coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞中大量拷貝,經(jīng)菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ雙酶切鑒定后,提取pET-28b-IL-1β質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達載體E.coli BL21(DE3)中,再次進行菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ雙酶切鑒定。將陽性單克隆接種于LB液體培養(yǎng)基,以終濃度為1mmol/L IPTG進行誘導(dǎo),用SDS-PAGE電泳檢測IL-1β蛋白的表達及存在形式,通過Western blotting驗證表達產(chǎn)物是否為目的蛋白。【結(jié)果】成功構(gòu)建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表達載體pET-28b-IL-1β,該載體經(jīng)誘導(dǎo)后表達出融合蛋白,分子質(zhì)量為32.4ku,主要以包涵體的形式表達;經(jīng)Western blotting檢測,帶有6×His標(biāo)簽的融合蛋白有很好的反應(yīng)原性。【結(jié)論】成功構(gòu)建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表達載體pET-28b-IL-1β,其在大腸桿菌BL21(DE3)中經(jīng)誘導(dǎo)后表達出分子質(zhì)量約為32.4ku的IL-1β融合蛋白。
【作者單位】： 塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;塔里木大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院;新疆兵團塔里木畜牧科技重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 多浪羊 IL-β基因 原核表達
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目“棉酚對新疆多浪羊白細(xì)胞介素表達的影響研究”(30960277) 創(chuàng)新群體項目“南疆地區(qū)羊標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖的群發(fā)病防控及預(yù)警響應(yīng)機制研究”(TDZKCX201401)
【分類號】：S826
【正文快照】： 新疆多浪羊是新疆南疆特色肉羊品種,其個體大、增重快,適合農(nóng)區(qū)飼養(yǎng),羔羊可當(dāng)年育肥并屠宰,并具有耐干旱、耐熱、耐低營養(yǎng)水平及抗逆、抗病、適應(yīng)性強等優(yōu)良性狀,對荒漠化、半荒漠化等惡劣生態(tài)環(huán)境有較高的適應(yīng)性。白細(xì)胞介素(Interleukin,IL)是重要的細(xì)胞因子之一,IL-1有2種

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐亞歐;袁忠;毛德才;毛亮;鄭玉才;;牦牛銅鋅超氧化物歧化酶原核表達載體的構(gòu)建及其表達研究[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年23期

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7 李莉;童雄;田力;王，

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