本文關(guān)鍵詞：HIF-1α基因介導(dǎo)的牙髓干細(xì)胞血管向分化的體外研究

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【摘要】：目的將HIF-1α基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至牙髓干細(xì)胞(DPSCs)中,運(yùn)用基因工程技術(shù),檢測HIF-1α基因誘導(dǎo)DPSCs在體外的成血管分化的作用。方法對HIF-1α進(jìn)行402、564、和803位點(diǎn)的基因突變,使其在常氧狀態(tài)下實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)并且能夠保持高度活性,構(gòu)建突變型、野生型以及對照組的慢病毒載體;體外培養(yǎng)DPSCs;分別用3種慢病毒轉(zhuǎn)染DPSCs后,檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率、目的基因HIF-1α在m RNA及蛋白水平的表達(dá),MTT檢測慢病毒載體對細(xì)胞增殖的影響;目的基因轉(zhuǎn)染成功后,分別于0,1,4,7,14,21天收集細(xì)胞,q PCR、Western blot法檢測HIF-1α調(diào)控DPSCs成血管相關(guān)因子的基因和蛋白表達(dá)情況,并比較三種慢病毒載體對DPSCs作用的區(qū)別。結(jié)果DPSCs轉(zhuǎn)染病毒MOI值設(shè)定為10 pfu/cell,轉(zhuǎn)染病毒7 d后,倒置熒光顯微鏡觀察病毒轉(zhuǎn)染效果最好,此時(shí)轉(zhuǎn)染效率達(dá)90%以上。MTT結(jié)果表明突變組和野生組吸光值高于對照組,而突變組又大于野生組,HIF-1α基因還有促進(jìn)DPSCs增殖的作用。通過q PCR和Western blot的檢測方法從基因和蛋白水平驗(yàn)證了目的基因HIF-1α的成功表達(dá)。目的基因轉(zhuǎn)染成功后,分別于0,1,4,7,14,21天收集細(xì)胞,q PCR、Western blot法檢測結(jié)果顯示HIF-1α能夠上調(diào)DPSCs成血管相關(guān)因子(VEGF、SDF-1及Ang-2)的基因和蛋白表達(dá)(P0.05)。突變組和野生組的成血管作用明顯強(qiáng)于對照組(P0.05),而突變組又優(yōu)于野生組(P0.05)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)在體外從基因和蛋白水平檢測并證明了HIF-1α能夠誘導(dǎo)DPSCs促血管生成因子(VEGF、SDF-1及Ang-2)表達(dá)的增加。初步證實(shí)了HIF-1α基因可以促進(jìn)DPSCs血管向分化作用。
【關(guān)鍵詞】：HIF-1α DPSCs 慢病毒轉(zhuǎn)染 成血管
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R781
【目錄】：

• 中英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-16
• 2 材料與方法16-20
• 2.1 主要設(shè)備和材料16-17
• 2.2 慢病毒載體Lenti-MT、Lenti-WT及Lenti-Lac Z的構(gòu)建17
• 2.3 DPSCs的培養(yǎng)和分離17-18
• 2.4 HIF-1α 基因轉(zhuǎn)染DPSCs最佳MOI值的測定18-19
• 2.5 MTT比色分析慢病毒對DPSCs細(xì)胞增殖水平的影響19
• 2.6 q PCR測定目的基因HIF-1α 以及成血管相關(guān)因子（VEGF、SDF-1、Ang-2）的m RNA的表達(dá)19
• 2.7 Western blot法檢測HIF-1α 蛋白以及成血管相關(guān)蛋白（VEGF、SDF-1、Ang-2）的表達(dá)19-20
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理20
• 3 結(jié)果20-22
• 3.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率檢測20
• 3.2 慢病毒轉(zhuǎn)染對DPSCs增殖的影響20-21
• 3.3 目的基因檢測21
• 3.4 HIF-1α 促進(jìn)DPSCs成血管因子m RNA表達(dá)的檢測21
• 3.5 HIF-1α 促進(jìn)DPSCs成血管因子蛋白表達(dá)的檢測21-22
• 4 討論22-26
• 5 結(jié)論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-33
• 附圖33-38
• 附錄38-39
• 致謝39-40
• 綜述40-50
• 參考文獻(xiàn)47-50

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本文編號：1115463