本文關(guān)鍵詞：熱應(yīng)激過程中虹鱒熱休克蛋白基因HSP40和HSP90β mRNA表達變化

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【摘要】：虹鱒(Oncorhynchus mykiss)屬于典型的冷水性魚類,對高溫的耐受能力差,其適宜生長的溫度范圍為12℃~18℃。為了明確虹鱒熱應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)控機制,本研究采用Real-time FQ-PCR(fluorescent quantitative polymerase chain reaction)方法,對熱應(yīng)激前(18℃,0 h)、25℃持續(xù)熱應(yīng)激2 h、4 h、8 h和12 h以及應(yīng)激后恢復6 h(18℃,HSR)的虹鱒鰓、肝臟、脾臟、心臟、頭腎和全腦等6種組織中HSP40和HSP90βmRNA表達變化進行了檢測分析。具體結(jié)果如下:1.熱應(yīng)激前,心臟和腦組織中HSP40和HSP90βmRNA表達量均比較高(P0.05);25℃熱應(yīng)激可上調(diào)虹鱒各組織中HSP40和HSP90βmRNA的表達量,在持續(xù)熱應(yīng)激過程中,HSPs均表現(xiàn)為先上升后下降的趨勢。2.熱應(yīng)激過程中,HSP40在心臟組織的表達量最高,其次為肝臟組織和腦組織。鰓組織HSP40 mRNA表達量在2 h達到最大值,心臟、肝臟、脾臟、頭腎和腦組織均在4 h達到最大值。3.熱應(yīng)激過程中,HSP90β在心臟組織中表達量最高,其次為腦組織和肝組織。心臟和脾臟組織中HSP90βmRNA表達量均在4 h達到最大值,腦組織中在8 h達到最大值,鰓、肝臟和頭腎組織中均在12 h達到最大值。4.與熱應(yīng)激前相比,熱應(yīng)激過程中HSP40和HSP90βmRNA表達量的上調(diào)倍數(shù)最大的組織均為脾臟組織,說明脾臟組織對熱刺激最為敏感。5.熱應(yīng)激過程中,心臟、腦和肝臟中HSP40、HSP90β的表達量均較高;熱應(yīng)激恢復后,心臟和腦組織中的HSP40未恢復到熱應(yīng)激前水平,肝臟和腦組織中的HSP90β未恢復到熱應(yīng)激前水平。推測心臟、腦和肝這些組織可能重點受到保護,并在熱壓力消除后,其恢復較為緩慢。
【關(guān)鍵詞】：虹鱒 熱休克蛋白 熱應(yīng)激 HSP40 HSP90β mRNA FQ-PCR
【學位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4
【目錄】：

• 摘要4-5
• Summary5-10
• 第一章 文獻綜述10-24
• 1 虹鱒的生物學特性10-11
• 1.1 形態(tài)特征10-11
• 1.2 生態(tài)習性11
• 1.3 繁殖習性11
• 2 應(yīng)激11-13
• 2.1 應(yīng)激的概念11-12
• 2.2 魚類養(yǎng)殖生產(chǎn)中常見的應(yīng)激源12
• 2.3 魚類的應(yīng)激反應(yīng)12-13
• 2.4 熱應(yīng)激13
• 3 HSPs的簡述13-18
• 3.1 HSPs及其發(fā)現(xiàn)過程13-14
• 3.2 HSPs分類14
• 3.3 HSPs生物學特性14-15
• 3.4 HSPs主要生物學功能15-16
• 3.5 HSPs的基因表達調(diào)節(jié)16
• 3.6 魚類HSPs國內(nèi)外研究現(xiàn)狀16-17
• 3.7 HSP40及HSP9017-18
• 4 Real-time FQ-PCR分析技術(shù)18-24
• 4.1 Real-time FQ-PCR原理19-20
• 4.2 Real-time FQ-PCR中熒光標記方法的分類20-21
• 4.2.1 非特異性的DNA結(jié)合染料法20
• 4.2.2 特異性熒光定量PCR20-21
• 4.3 Real-time FQ-PCR定量分析方法21-22
• 4.3.1 相對定量分析21-22
• 4.3.2 絕對定量分析22
• 4.4 Real-time FQ-PCR技術(shù)的應(yīng)用22-24
• 第二章 材料與方法24-36
• 1 試驗材料24-26
• 1.1 試驗動物24
• 1.2 主要儀器設(shè)備及試劑24-25
• 1.2.1 主要儀器設(shè)備24-25
• 1.2.2 普通試劑25
• 1.2.3 分子生物學試劑25
• 1.3 溶液配制25-26
• 1.3.1 RNA提取試劑配制26
• 1.3.2 瓊脂糖凝膠電泳相關(guān)溶劑配制26
• 2 試驗方法26-33
• 2.1 熱應(yīng)激處理及其采樣26-27
• 2.2 總RNA的提取方法27-28
• 2.3 RNA濃度及純度檢測28-30
• 2.3.1 瓊脂糖凝膠電泳檢測28-29
• 2.3.2 采用超微量分光光度計檢測29-30
• 2.4 cDNA第一條鏈合成30-31
• 2.4.1 基因組DNA的除去反應(yīng)30
• 2.4.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)30-31
• 2.5 引物設(shè)計與合成31-32
• 2.6 普通PCR反應(yīng)篩選擴增條件32
• 2.7 Real-time FQ-PCR32-33
• 3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理33-36
• 第三章 結(jié)果與分析36-45
• 1 總RNA提取質(zhì)量36
• 2 普通PCR擴增產(chǎn)物36-38
• 3 Real-time FQ-PCR動力學曲線38-39
• 4 Real-time FQ-PCR熔解曲線39-40
• 5 HSP40 mRNA表達差異40-42
• 5.1 HSP40 mRNA組織表達差異40-41
• 5.2 同一組織HSP40 mRNA隨應(yīng)激時間表達變化41-42
• 6 HSP90β mRNA表達差異42-45
• 6.1 HSP90β mRNA組織表達差異42-43
• 6.2 同一組織HSP90β mRNA隨應(yīng)激時間表達變化43-45
• 第四章 討論45-50
• 1 熱應(yīng)激對虹鱒各組織HSP40和HSP90β mRNA表達水平的影響45-50
• 1.1 熱應(yīng)激下虹鱒鰓組織HSP40和HSP90β mRNA的表達45-46
• 1.2 熱應(yīng)激下虹鱒腦組織HSP40和HSP90β mRNA的表達46-47
• 1.3 熱應(yīng)激下虹鱒肝臟組織HSP40和HSP90β mRNA的表達47-48
• 1.4 熱應(yīng)激下虹鱒心臟組織HSP40和HSP90β mRNA的表達48-49
• 1.5 熱應(yīng)激下虹鱒脾臟和頭腎組織HSP40和HSP90β mRNA的表達49-50
• 第五章 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-58
• 致謝58-59
• 作者簡介59-60
• 導師簡介60-61

【參考文獻】

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本文編號：1110525