本文關(guān)鍵詞：獨(dú)行菜磷酸甲羥戊酸激酶LaPMK基因克隆、生物信息學(xué)分析及原核表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 獨(dú)行菜 磷酸甲羥戊酸激酶 萜類合成 基因克隆 原核表達(dá)

【摘要】：目的從獨(dú)行菜Lepidium apetalum中克隆萜類合成途徑關(guān)鍵酶磷酸甲羥戊酸激酶(phosphomevalonate kinase,PMK)基因,進(jìn)行序列分析和原核表達(dá)。方法根據(jù)獨(dú)行菜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中La PMK基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,克隆得到La PMK基因的開(kāi)放閱讀框(open reading frame,ORF),構(gòu)建p ET32a-La PMK原核表達(dá)載體,在大腸桿菌BL21(DE3)中用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)La PMK融合蛋白。結(jié)果 La PMK基因ORF全長(zhǎng)為1 518 bp(Genbank注冊(cè)號(hào)KT004541),編碼505個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示La PMK蛋白沒(méi)有跨膜區(qū),不含信號(hào)肽,位于細(xì)胞質(zhì)中,含有GHMP激酶家族特異的N末端和C末端的保守結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)結(jié)果顯示La PMK蛋白與蕪菁的PMK蛋白具有92%的序列相似性,親緣關(guān)系較近。構(gòu)建p ET32a-La PMK原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中成功表達(dá)La PMK融合蛋白。結(jié)論克隆了La PMK基因,建立其穩(wěn)定的原核表達(dá)體系,為L(zhǎng)a PMK蛋白純化、抗體的制備,進(jìn)一步研究La PMK基因在獨(dú)行菜萜類合成途徑中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院;呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： 獨(dú)行菜 磷酸甲羥戊酸激酶 萜類合成 基因克隆 原核表達(dá)
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃“973計(jì)劃”項(xiàng)目(2013CB531802) 河南中醫(yī)學(xué)院博士科研基金(BSJJ2011-07)
【分類號(hào)】：S567.2
【正文快照】： 獨(dú)行菜Lepidium apetalum Willd.為十字花科(Cruciferae)獨(dú)行菜屬Lepidium L.植物,其成熟種子為傳統(tǒng)中藥北葶藶子,具有瀉肺平喘、利水消腫、強(qiáng)心之功效,含有強(qiáng)心苷、黃酮、三萜、甾醇、香豆素、生物堿、酚酸、揮發(fā)油等多種成分,對(duì)心血管、高血脂等疾病具有顯著功效,具有降壓、

【相似文獻(xiàn)】

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10 馬文濤;閆若潛;吳志明;劉光輝;盛敏;謝彩華;;豬白細(xì)胞介素-6的原核表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

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3 黃新河;小鼠TAp63γ的原核表達(dá)、純化、結(jié)構(gòu)及功能初步研究[D];四川大學(xué);2007年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：1109228