本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)GsPPCK1基因苜蓿植株的獲得及其耐堿性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【題名】： 轉(zhuǎn)GsPPCK1基因苜蓿植株的獲得及其耐堿性分析

【作者】： 魏正巍,朱延明,化燁等

【機(jī)構(gòu)】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 黑龍江哈爾濱 150030

【關(guān)鍵詞】： 苜蓿,GsPPCK1,轉(zhuǎn)基因株系,耐堿性分析,Medicago sativa L.,GsPPCK1,Transgenic alfalfa,Alkaline tolerance analysis

【文摘】：

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶(phosphoenolpyruvate carboxylase kinase, PPCK)是一種鈣不依賴的絲氨酸/蘇氨酸(Ser/Thr)類蛋白激酶,參與碳氮代謝等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程,然而其在堿脅迫反應(yīng)中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道.本研究在前期野生大豆堿脅迫基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上,采用同源克隆的方法分離野生大豆(Glycine soja) PPCK1基因,該基因編碼的氨基酸序列與大豆(Glycine max) PPCK1蛋白(AAQ83695.1)具有99%的相似性,被命名為GsPPCK1.在50 mmol L–1 NaHCO3脅迫處理3 h內(nèi),根和葉中GsPPCK1基因上調(diào)表達(dá),屬堿脅迫早期應(yīng)答基因.通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)肇東苜蓿進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,并對(duì)RT-PCR陽(yáng)性的超表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行耐堿性分析,在100 mmol L–1 NaHCO3處理15 d后轉(zhuǎn)基因株系生長(zhǎng)狀態(tài)良好,而非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩晗得黠@萎蔫、失綠、甚至死亡;轉(zhuǎn)基因株系的丙二醛含量和相對(duì)質(zhì)膜透性顯著低于非轉(zhuǎn)基因株系(P<0.05),而葉綠素含量和根系活力顯著高于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ?P<0.05),說(shuō)明超量表達(dá)GsPPCK1基因增強(qiáng)了苜蓿的耐堿能力.以上結(jié)果表明, GsPPCK1參于植物耐堿脅迫反應(yīng)過(guò)程,在堿脅迫基因工程研究領(lǐng)域具有良好的理論和實(shí)際應(yīng)用意義.

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