本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定表達(dá)HBx和MicroRNA-21基因肝卵圓細(xì)胞株構(gòu)建的試驗(yàn)研究

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【摘要】：目的研究構(gòu)建可以穩(wěn)定表達(dá)HBx和MicroRNA-21基因的肝卵圓細(xì)胞株的方法。方法采用LE培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠卵圓細(xì)胞株(LE/6),以質(zhì)粒Pc DNA3.1-HBVx中的HBVx序列為模板,PCR法擴(kuò)增得到目的基因片段A。將HBx目的基因片段和質(zhì)粒載體p EGFP-Nl進(jìn)行雙酶切,線性化得到重組質(zhì)粒命名為p EGFP-HBx。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸埃希菌DH5a,并進(jìn)行篩選培養(yǎng)。用脂質(zhì)體法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染卵圓細(xì)胞,作為p EGFP-HBx組;用脂質(zhì)體法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染質(zhì)粒載體p EGFP-Nl,作為p EGFP-NI質(zhì)粒組。最后將Pre-MicroRNA-21與HBx-LE/6共培養(yǎng),培養(yǎng)24 h后用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞的熒光表達(dá)情況。結(jié)果 p EGFP-HBx中GFP表達(dá)量經(jīng)熒光定量PCR儀器確定為92.28%,且表達(dá)程度強(qiáng);Pre-MicroRNA-21與HBx-LE/6共培養(yǎng)完成后,p EGFP-HBx組內(nèi)MicroRNA-21的轉(zhuǎn)錄水平經(jīng)儀器測(cè)量為1.77±0.24,顯著高于p EGFP-NI質(zhì)粒組內(nèi)的0.36±0.21,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論本研究成功地構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)HBx和MicroRNA-21基因肝卵圓細(xì)胞株,為進(jìn)一步研究HBx蛋白、mi RNA-21、肝卵圓細(xì)胞與肝癌之間的關(guān)系提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院急診外科;
【關(guān)鍵詞】： HBx MicroRNA-基因 肝卵圓細(xì)胞 大腸埃希菌DHa 質(zhì)粒載體pEGFP-Nl
【基金】：江西省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2012ZBAB205001) 江西省科技廳支撐計(jì)劃項(xiàng)目(20112BBG70037) 江西省贛州市指導(dǎo)性科技計(jì)劃任務(wù)(2011)
【分類號(hào)】：R735.7
【正文快照】： 乙型肝炎病毒(HBV)感染是原發(fā)性肝癌(肝癌)的重要危險(xiǎn)因素,HBV基因結(jié)構(gòu)中包括S、C、P與X 4個(gè)開放閱讀框,可起到反轉(zhuǎn)錄激活作用,激活大部分的病毒與腫瘤基因,直接作用于肝癌的發(fā)生、發(fā)展,而Micro RNA屬于內(nèi)源性非編碼小RNA,影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[1-2]。近來(lái)有研究表明,在多種腫

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本文編號(hào)：1098629