本文關(guān)鍵詞：油菜FAD2基因的克隆與功能分析

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【摘要】：油酸去飽和酶FAD2基因催化C18∶1脂肪酸脫氫生成C18∶2脂肪酸,直接決定了油料作物的油脂品質(zhì),同時對植物的抗凍能力至關(guān)重要。通過RT-PCR從甘藍型油菜品種"中雙9號"中克隆了Bn FAD2基因的全長c DNA序列,該基因編碼一個長384aa的脂肪酸去飽和酶蛋白,分子量44.2 ku,等電點p I值為8.54,對應(yīng)的基因組序列無內(nèi)含子。使用熒光定量RT-PCR發(fā)現(xiàn)它在種子發(fā)育到25 d時轉(zhuǎn)錄水平最高;使用生物信息學(xué)手段發(fā)現(xiàn)該蛋白具有6個跨膜區(qū),定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上,不含信號肽。將該基因克隆到植物轉(zhuǎn)基因載體p BILP2PTNap中,通過農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)轉(zhuǎn)化了擬南芥fad2基因突變體,使其在種子中超量表達,共獲得20株轉(zhuǎn)基因陽性植株。使用氣相色譜法比較野生型植株、突變體植株、轉(zhuǎn)基因陽性植株種子中脂肪酸的組成成分,結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因前后,種子中油酸(C18∶1)的含量從53.8%降低到12.4%~34.1%,亞油酸(C18∶2)含量從2.9%提高到11.5%~62.7%,說明這些轉(zhuǎn)入的Bn FAD2基因在不同植株中均能不同程度地互補fad2突變體的表型,證明克隆得到的油菜Bn FAD2基因具有完整的催化功能。
【作者單位】： 肇慶學(xué)院果樹研究所/肇慶學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 油酸去飽和酶 油菜 基因克隆 轉(zhuǎn)基因 功能分析
【基金】：肇慶學(xué)院自然科學(xué)項目(201103);肇慶學(xué)院科研創(chuàng)新團隊項目(201205)
【分類號】：S565.4
【正文快照】： 油酸去飽和酶FAD2是一種定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的Δ-12去飽和酶[1-2],主要功能是催化單價不飽和脂肪酸C18∶1Δ9(油酸)在C12和C13之間脫氫,生成二價不飽和脂肪酸C18∶2Δ9,12(亞油酸),從而決定植物油脂中脂肪酸的不飽和程度,影響油脂品質(zhì)[3]。FAD2蛋白結(jié)合在膜上,很難分離純化,因此研

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本文編號：1097678