本文關鍵詞：德式乳桿菌保加利亞亞種分解代謝控制蛋白CcpA基因敲除突變株的構建

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【摘要】：在革蘭氏陽性菌中,分解代謝控制蛋白(Ccp A)是一種參與碳代謝和氮代謝的多效調(diào)控蛋白。利用同源重組技術,以德式乳桿菌保加利亞亞種為研究對象,構建Ccp A基因敲除突變株。首先以德式乳桿菌保加利亞亞種ATCC11842基因組DNA和質(zhì)粒p BR322為模板,擴增Ccp A基因和四環(huán)素抗性基因(Tet),然后分別將Ccp A基因和Tet基因連接到載體p Back Zero-T Vector上,再對中間載體p Back Zero-Ccp A和p Back Zero-Tet進行雙酶切,回收純化雙酶切后的目的片段并連接獲得Ccp A基因敲除的重組載體p CT。通過同源重組篩選Ccp A基因敲除突變株,菌落PCR和測序鑒定結(jié)果均顯示Ccp A基因敲除突變株構建成功,這為闡明該調(diào)控蛋白在德式乳桿菌保加利亞亞種代謝過程中的作用奠定了基礎。
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學食品學院乳品科學教育部重點實驗室;
【關鍵詞】： 分解代謝控制蛋白 德式乳桿菌保加利亞亞種 基因敲除 突變株
【基金】：國家自然科學基金項目(31201397) 乳品科學教育部重點實驗室開放課題(2012KLDSOF-06)
【分類號】：Q78
【正文快照】： 碳分解代謝物阻遏(carbon catabolite repres-sion,CCR)是指微生物在混合碳源發(fā)酵時優(yōu)先利用速效碳源(通常為葡萄糖),且該碳源的代謝產(chǎn)物抑制其它非速效碳源代謝的相關基因表達和蛋白活性,從而影響非速效碳源利用的現(xiàn)象。在低GC含量革蘭氏陽性菌中,CCR效應的關鍵調(diào)控因子為分

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本文編號：1091842