本文關(guān)鍵詞：脂環(huán)酸芽孢桿菌D-1的耐鹽內(nèi)切葡聚糖酶基因克隆、表達(dá)與酶學(xué)性質(zhì)

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【摘要】：【目的】克隆溫泉中嗜熱嗜酸的脂環(huán)酸芽孢桿菌D-1(Alicyclobacillus tengchongensis CGMCC1504)的內(nèi)切葡聚糖酶基因gluE1,并對(duì)該酶進(jìn)行序列分析和重組酶的酶學(xué)特性分析。【方法】通過全基因組測(cè)序獲得gluE1全長(zhǎng),并對(duì)其氨基酸序列(GluE1)進(jìn)行分析。將gluE1重組到載體p EASY-E2中并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中異源表達(dá),利用組氨酸標(biāo)簽純化GluE1并進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)分析�！窘Y(jié)果】gluE1與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中GH5的內(nèi)切葡聚糖酶具有較高的相似性,全長(zhǎng)1020 bp,GC含量50.5%,編碼339個(gè)氨基酸(40.45 k Da)。GluE1與數(shù)據(jù)庫(kù)中序列的最高一致性為97%,與其余纖維素酶的一致性60%。GluE1可水解CMC-Na、可溶性淀粉和大麥β-葡聚糖,表觀最適pH為6.5,pH 5.0 10.0穩(wěn)定并維持60%以上的酶活性。GluE1的表觀最適溫度為55℃,在37℃下穩(wěn)定。在55℃ pH 6.5條件下,GluE1對(duì)大麥β-葡聚糖的K_m、V_(max)和k_(cat)分別為8.58 mg/mL、416.67 U/mg和280.90 s~( 1)。GluE1受Ag~+、Hg~(2+)及SDS抑制,β-巰基乙醇、Pb~(2+)、Mg~(2+)、Ca~(2+)和Na~+對(duì)GluE1有微弱的促進(jìn)作用,NaCl對(duì)GluE1的影響不大,加入30%的NaCl,仍有64%以上的酶活性;經(jīng)30%的NaCl在37℃下處理60 min,仍能保持93%以上的活性�！窘Y(jié)論】首次報(bào)道從Alicyclobacillus屬的細(xì)菌中克隆得到內(nèi)切葡聚糖酶基因并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究,GluE1具有良好的pH穩(wěn)定性和有較強(qiáng)的耐鹽性,可能具有更大應(yīng)用潛力。
【作者單位】： 云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物能源持續(xù)開發(fā)利用教育部工程中心云南省生物質(zhì)能與環(huán)境生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室云南省酶工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 纖維素酶 內(nèi)切葡聚糖酶 異源表達(dá) 酶學(xué)特性
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31160229) 云南省教育廳科學(xué)研究基金(2015Y104)~~
【分類號(hào)】：Q936;Q78
【正文快照】： 纖維素是地球上最豐富的可再生資源,如果能充分利用纖維素資源,將對(duì)緩解全球的能源危機(jī),食品和飼料資源緊張以及環(huán)境污染有重大意義[1]。纖維素酶是指所有參與降解纖維素的各種酶的總稱,廣泛存在于多種微生物中,由3種酶組成:內(nèi)切-1,4-β-D-葡聚糖酶(endo-1,4-β-D-glucanases,

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

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9 伍紅;農(nóng)向;張琪;譚德勇;秦天鶯;;瑞氏木霉發(fā)酵液中β-內(nèi)切葡聚糖酶Eg1、Eg2的純化及部分酶學(xué)性質(zhì)研究[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 周烈;耐熱、高活性雜合內(nèi)切葡聚糖酶基因的設(shè)計(jì)、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究[D];浙江大學(xué);2010年

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3 劉淑艷;絲狀真菌尖鐮孢Fusarium oxysporum L19嗜熱內(nèi)切葡聚糖酶的研究[D];山東大學(xué);2006年

4 王磊;轉(zhuǎn)植酸酶和內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌的構(gòu)建及其肉雞飼喂效果驗(yàn)證[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

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7 范曉靜;植物內(nèi)生細(xì)菌GFP標(biāo)記及兩個(gè)基因與定殖的關(guān)系[D];福建農(nóng)林大學(xué);2009年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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4 萬玉軍;β-葡萄糖苷酶基因和內(nèi)切葡聚糖酶基因在大腸桿菌中的共表達(dá)及發(fā)酵條件研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 李雨霏;定點(diǎn)突變技術(shù)改變大腸桿菌f-10內(nèi)切葡聚糖酶基因及其性質(zhì)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 白利葉;桑青枯菌快速檢測(cè)靶標(biāo)內(nèi)切葡聚糖酶抗體的制備與檢測(cè)[D];重慶師范大學(xué);2016年

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10 周潭澈;嗜熱液化芽孢桿菌內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆和表達(dá)[D];南京林業(yè)大學(xué);2008年

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