發(fā)布時間：2017-10-24 12:07

  本文關鍵詞：番荔枝花器官發(fā)育基因AsAG的克隆、亞細胞定位及表達分析

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【摘要】：【目的】從番荔枝中分離花器官特征決定基因AGAMOUS,并進行亞細胞定位及基因表達分析,為進一步研究該基因參與調(diào)控花發(fā)育調(diào)控的分子機理,及解決番荔枝花發(fā)育異常問題奠定基礎�！痉椒ā恳苑笾Τ墒旎椴牧�,通過試劑盒提取總RNA,并以RACE方法克隆獲得基因AG的全長序列。序列拼接和氨基酸序列分析采用DNAMAN軟件;相似性分析通過BLASTn和BLASTp程序進行;進化樹構建采用MEGA 5.1軟件;蛋白質(zhì)二級結構預測與3D結構建模分別采用Ex Pa Sy的SOPMA和Phyre2程序進行;亞細胞定位表達采用煙草上皮細胞瞬時轉(zhuǎn)染系統(tǒng)和基因槍轟擊洋蔥表皮細胞方法;AG在花發(fā)育不同時期、不同器官及不同激素信號分子處理下的表達特性分析,利用實時熒光定量RT-PCR方法�！窘Y果】從番荔枝中克隆得到AGAMOUS,其c DNA全長ORF序列長度為669 bp,編碼222個氨基酸,命名為As AG,序列提交到Gen Bank(登錄號為KT159768)。二級結構預測發(fā)現(xiàn)As AG所編碼蛋白由延伸鏈結構(俄extended strand)、α-螺旋(alpha helix)、β-轉(zhuǎn)角(beta turn)和不規(guī)則卷曲(random coil)組成,四者比例分別為14.41%、59.46%、8.11%和18.02%。生物信息學分析顯示As AG編碼的蛋白與海棗(XP008781978.1)、蘆筍(BAD83772.1)、擬南芥(AT4G18960)、油棕(XP 010912706.1)、山玉蘭(AFH74390.1)、石斛(ABQ08574.1)、紅花玉蘭(AEO52692.1)等同源蛋白的相似度達79%—84%。ASAG蛋白含有一個高度保守的MADS-box結構域和一個次級保守的K區(qū),該蛋白分子量為25.7 k Da,等電點為9.15,為穩(wěn)定蛋白,無信號肽。亞細胞定位顯示As AG編碼蛋白定位于細胞核。實時定量RT-PCR結果表明,As AG在不同的器官中表達量存在差異,在花中表達量最高。As AG在番荔枝花發(fā)育的整個過程中都有表達,而在花蕾期Ⅳ中表達量最高。進一步分析發(fā)現(xiàn)As AG的表達水平呈現(xiàn)花器官特異性分布(雄蕊雌蕊萼片花瓣)。進一步研究表明,As AG在畸形花中的表達量低于正�；�。檢測GA和ABA等不同信號分子分別處理番荔枝花芽2 h和4 h后As AG的表達量,結果表明As AG的表達受GA負調(diào)控,受ABA正調(diào)控�！窘Y論】推測番荔枝As AG可能參與雌蕊和雄蕊的發(fā)育及激素信號的響應。
【作者單位】： 嶺南師范學院生命科學與技術學院;
【關鍵詞】： 番荔枝 AG 花發(fā)育 表達模式
【基金】：國家自然科學基金(31201586) 廣東省科技計劃(2013B020304008) 廣東省教育廳科技創(chuàng)新項目(2013KJCX0124) 國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(201510579300) 嶺南師范學院自然科學研究項目(LZL1507);嶺南師范學院協(xié)同創(chuàng)新中心項目(CIL1503);嶺南師范學院科研創(chuàng)新團隊資助項目(2013CXTD05)
【分類號】：S667.9
【正文快照】： 0引言【研究意義】番荔枝(Annona squamosa L.)又稱林檎、釋迦果,俗稱甜荔枝、甜果,為番荔枝科(Annonaceae)落葉小喬木,是熱帶、亞熱帶優(yōu)稀水果。番荔枝在中國南方均有種植,尤以廣東、廣西、海南、福建等省份有較大面積栽培[1-4]。番荔枝的花具有雌雄異熟和雌蕊先熟的特性,自

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