本文關(guān)鍵詞：LRP16基因體外調(diào)控脂聯(lián)素和胰島素抵抗的作用及機(jī)制探討

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【摘要】：目的：觀察LRP16基因?qū)χ?lián)素、胰島素信號(hào)通路的影響,體外探討脂聯(lián)素信號(hào)通路參與LRP16調(diào)控胰島素抵抗的可能機(jī)制。方法：慢病毒構(gòu)建并鑒定四組LRP16基因的HepG2穩(wěn)定細(xì)胞系：過(guò)表達(dá)、過(guò)表達(dá)對(duì)照、抑制表達(dá)及抑制表達(dá)對(duì)照。對(duì)以上四組細(xì)胞系分別予以PBS、胰島素(100nM, 30min)、脂聯(lián)素(2μg/ml,15min)、脂聯(lián)素預(yù)處理后加胰島素(脂聯(lián)素2μg/ml,15min后加胰島素100nM,30min)的不同處理,分別用比色法觀察細(xì)胞葡萄糖攝取率變化、酶法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和膽固醇含量、Q-PCR觀察糖脂代謝酶Fatp2等的表達(dá)、Western blot檢測(cè)P13K和AMPK信號(hào)通路磷酸化及蛋白表達(dá),檢測(cè)各組在胰島素刺激下及有或無(wú)脂聯(lián)素預(yù)處理下的脂聯(lián)素、胰島素信號(hào)通路變化差別。采集LRP16過(guò)表達(dá)和對(duì)照細(xì)胞對(duì)應(yīng)8個(gè)處理組的RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析。結(jié)果：1、LRP16過(guò)表達(dá)明顯抑制了HepG2細(xì)胞在胰島素和脂聯(lián)素刺激下的葡萄糖攝取,上調(diào)pIRS-1 (Ser307)蛋白表達(dá)和下調(diào)PI3-K (p85)、pAKT (Ser473)蛋白表達(dá)；抑制LRP16促進(jìn)HepG2細(xì)胞在胰島素和脂聯(lián)素刺激下的葡萄糖攝取,下調(diào)pIRS-1 (Ser307)蛋白表達(dá)和上調(diào)PI3-K (p85)、pAKT (Ser473)蛋白表達(dá)。2、LRP16過(guò)表達(dá)下調(diào)HepG2細(xì)胞在脂聯(lián)素刺激下細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和膽固醇含量,減弱脂聯(lián)素對(duì)Fatp2. Fatp5、ACC、Acsl5基因mRNA下調(diào)作用,同時(shí)下調(diào)pAMPKa(Thr172)蛋白表達(dá)；抑制LRP16上調(diào)HepG2細(xì)胞在脂聯(lián)素刺激下細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和膽固醇含量,增強(qiáng)脂聯(lián)素對(duì)Fatp2、Fatp5、ACC、Acs15基因mRNA下調(diào)作用,同時(shí)上調(diào)pAMPKa(Thr172)蛋白表達(dá)。3、轉(zhuǎn)錄組分析,基因差異表達(dá)分析顯示LRP16過(guò)表達(dá)能同時(shí)下調(diào)胰島素信號(hào)通路中INSR、IRS、PI3K、GLUT4等蛋白和脂聯(lián)素信號(hào)通路中的AdipoR、AMPK、 PPARα等蛋白的表達(dá)。信號(hào)通路差異化富集分析顯示LRP16過(guò)表達(dá)下調(diào)了甾體激素合成途徑中固醇硫酸酯酶、乙醇磺基轉(zhuǎn)移酶、膽甾醇加氧酶的表達(dá)。結(jié)論：LRP16基因通過(guò)抑制P13K信號(hào)通路導(dǎo)致HepG2細(xì)胞的胰島素抵抗,同時(shí)可通過(guò)抑制AMPK信號(hào)通路抑制脂聯(lián)素的胰島素增敏作用,通過(guò)減弱甾體激素合成途徑來(lái)影響脂聯(lián)素的糖脂代謝作用,脂聯(lián)素信號(hào)通路參與了LRP16對(duì)胰島素抵抗的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：LRP16脂聯(lián)素 胰島素抵抗
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 研究背景12-14
• 材料和方法14-23
• 結(jié)果23-43
• 討論43-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-65
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況65-66
• 致謝66

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