本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-150通過靶向作用于RUNX2基因抑制骨肉瘤細(xì)胞系增殖

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【摘要】：目的:研究人骨肉瘤細(xì)胞系(Saos-2,MG-63)中microRNA-150(miR-150)表達(dá)水平及其對(duì)細(xì)胞增殖的作用,并探討其分子生物學(xué)作用機(jī)制。方法:采用相對(duì)實(shí)時(shí)定量PCR檢測人骨肉瘤細(xì)胞系Saos-2,MG-63和正常成骨細(xì)胞系NHOst中miR-150表達(dá)差異。采用慢病毒轉(zhuǎn)染過表達(dá)miR-150,實(shí)時(shí)定量PCR檢測過表達(dá)組miR-150水平。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)采用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法。Western印跡檢測Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)及內(nèi)參β-actin蛋白水平。雙熒光素酶反應(yīng)檢測miR-150與RUNX2 3'-UTR結(jié)合對(duì)上游基因表達(dá)抑制率。結(jié)果:MiR-150在Saos-2和MG-63細(xì)胞系中表達(dá)低于正常成骨細(xì)胞系NHOst,分別為0.23±0.02,0.32±0.03和1.00±0.02,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。Saos-2細(xì)胞系空載體對(duì)照組和miR-150過表達(dá)組分別為1.00±0.08和4.17±0.19,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),MG-63細(xì)胞系空載體對(duì)照組和miR-150過表達(dá)組分別為1.00±0.07和3.43±0.10,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。過表達(dá)miR-150后,Saos-2和MG-63細(xì)胞增殖率明顯下降(P0.01),RUNX2蛋白量明顯降低(P0.01)。Saos-2細(xì)胞系中,miR-150結(jié)合RUNX2 3'-UTR區(qū)抑制69%上游熒光素酶活性(P0.05);MG-63細(xì)胞系中,miR-150抑制59%上游熒光素酶活性(P0.05)。在過表達(dá)miR-150的Saos-2和MG-63細(xì)胞中,補(bǔ)充外源性RUNX2蛋白,可恢復(fù)骨肉瘤細(xì)胞的增殖水平(P0.01)。結(jié)論:MiR-150具有抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖的作用,直接結(jié)合RUNX2 3'-UTR抑制轉(zhuǎn)錄因子RUNX2合成是其重要的作用機(jī)制。
【作者單位】： 天津市天津醫(yī)院創(chuàng)傷骨科;中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： miR- 骨肉瘤 RUNX
【基金】：湖南省自然科學(xué)基金(11JJ5079)~~
【分類號(hào)】：R738.1
【正文快照】： 第一作者(First author):王龍飛,Email:orthopfeng@outlook.com通信作者(Corresponding author):詹瑞森,Email:zhrs1960@163.com;陳世杰,Email:renjiediling1029@163.com骨肉瘤(osteosarcoma)起源于間葉組織,以產(chǎn)生骨樣組織的梭形基質(zhì)細(xì)胞為特征,骨肉瘤多累及10~20歲之間的青

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9 朱U，

本文編號(hào)：1074529