本文關鍵詞：生物鐘基因Per1對人口腔鱗狀細胞癌細胞增殖、凋亡、細胞周期和體內(nèi)成瘤的影響及機理

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【摘要】：目的探討生物鐘基因Per1對細胞周期相關基因的調(diào)控作用,以及對人口腔鱗狀細胞癌細胞SCC15增殖、凋亡、細胞周期和體內(nèi)成瘤的影響。方法構(gòu)建3組針對Per1 RNA的短發(fā)夾RNA(sh RNA)慢病毒重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染SCC15細胞,用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)及實時熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測篩選RNA干擾作用最強組為實驗組,對照組(Control-sh RNA)為對任何基因均無干擾效應的sh RNA序列的質(zhì)粒,空白組為未做任何處理的SCC15細胞。用q RT-PCR檢測各組細胞中細胞周期相關基因Per1、p53、Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin A2、Cyclin B1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、p16、p21、Wee1、cdc25、E2F、Rb1 mRNA的表達;用流式細胞儀檢測各組細胞增殖、凋亡和細胞周期分布;將實驗組和空白組細胞分別接種于裸鼠背部皮下,觀察成瘤情況。結(jié)果成功構(gòu)建了3組Per1-sh RNA慢病毒質(zhì)粒,通過q RT-PCR和Western blot證明Per1-sh RNA-Ⅰ組沉默效果最佳,作為實驗組。Per1-sh RNA-Ⅰ組中Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin B1、CDK1和Wee1 mRNA的表達水平高于Control-sh RNA組和SCC15組(P0.05),p53、Cyclin A2、p16、p21和cdc25 mRNA的表達水平降低(P0.05);Control-sh RNA組和SCC15組中各基因mRNA的表達水平無差異(P0.05)。CDK2、CDK4、CDK6、E2F和Rb1 mRNA的表達水平在3組中均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。Per1-sh RNA-Ⅰ組中細胞增殖指數(shù)高于Control-sh RNA組和SCC15組(P0.05),凋亡指數(shù)降低(P0.05),S期的細胞數(shù)降低(P0.05),G2/M期的細胞數(shù)增加(P0.05)。Control-sh RNA組和SCC15組細胞的增殖指數(shù)和凋亡指數(shù)無統(tǒng)計學差異(P0.05)。Per1-sh RNA-Ⅰ組細胞體內(nèi)成瘤能力顯著增強(P0.05)。結(jié)論生物鐘基因Perl是重要的抑癌基因,Perl能調(diào)控下游眾多的細胞周期基因,其表達變化影響細胞周期進程、增殖和凋亡的平衡失調(diào)及體內(nèi)成瘤能力,對Per1深入研究有可能進一步明確癌癥的發(fā)生發(fā)展機制,為癌癥的治療提供新的有效分子靶點。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科;
【關鍵詞】： 生物鐘 Per 細胞周期 基因 口腔癌
【分類號】：R739.8
【正文快照】： 生物體內(nèi)的許多生命活動,如激素分泌、細胞增殖等,均表現(xiàn)出近24 h的周期波動,稱為晝夜節(jié)律[1-3]。晝夜節(jié)律是生物適應外界環(huán)境長期進化的結(jié)果,是生命活動的基本特征之一。晝夜節(jié)律的產(chǎn)生由細胞內(nèi)生物鐘基因呈晝夜節(jié)律性表達所導致[1-4]。目前人們已發(fā)現(xiàn)14個生物鐘基因:Per1、P

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