本文關(guān)鍵詞：菊花DgWRKY5及DgWRKY4基因的克隆和功能鑒定

  更多相關(guān)文章： 菊花 煙草 DgWRKY5 DgWRKY4 基因表達(dá) 鹽脅迫

【摘要】：菊花作為我國十大傳統(tǒng)名花之一,除了有極高的觀賞、藥用、食用價值外,還有較高的經(jīng)濟(jì)價值,在世界各地廣泛栽植,深受廣大民眾的喜愛。然而在菊花的生產(chǎn)實踐過程中,常常受到如干旱、高鹽等不利環(huán)境因子的影響,因此,培育耐鹽性強(qiáng)的切花菊新品種成為菊花育種的重要目標(biāo)之一。本實驗以菊花為實驗材料,基于新一代高通量測序技術(shù)Illumina HiSeq 2000對菊花轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測序獲得數(shù)據(jù)庫,從中篩選出具有完整開放閱讀框的基因,利用電子克隆和RT-PCR技術(shù)克隆得到新的WRKY類轉(zhuǎn)錄因子,分別命名為DgWRKY5和DgWRKY4,后通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化菊花和煙草,分別獲得了轉(zhuǎn)DgWRKY5基因菊花和轉(zhuǎn)DgWRKY4基因煙草。序列分析顯示：DgWRKY5的開放閱讀框為1603bp,編碼540個氨基酸殘基,基因編碼蛋白質(zhì)分子量為60.0KDa,等電點為7.07；對獲得的轉(zhuǎn)DgWRKY5基因菊花進(jìn)行鹽脅迫試驗,在400mM NaCl鹽脅迫條件下,野生型的菊花葉片比轉(zhuǎn)基因菊花葉片發(fā)黃和萎蔫,而且葉綠素含量降低。序列分析顯示：DgWRKY4的開放閱讀框為1534bp,編碼482個氨基酸殘基,基因編碼蛋白質(zhì)分子量為53.6KDa,等電點為7.35；對獲得的轉(zhuǎn)DgWRKY4基因煙草進(jìn)行表型觀察發(fā)現(xiàn)：在正常情況下,野生型和4個轉(zhuǎn)DgWRKY4基因株系在整個生命周期中表型無顯著差異；對轉(zhuǎn)DgWRKY4基因煙草進(jìn)行鹽脅迫試驗,在150mM NaCl鹽脅迫條件下,轉(zhuǎn)基因煙草發(fā)芽率(58-60%)顯著高于野生型的煙草(25%)。
【關(guān)鍵詞】：菊花 煙草 DgWRKY5 DgWRKY4 基因表達(dá) 鹽脅迫
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S682.11;Q943.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 縮略詞表6-9
• 1. 文獻(xiàn)綜述9-19
• 1.1 植物轉(zhuǎn)錄因子簡述9-11
• 1.1.1 植物轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點9-11
• 1.1.2 與植物逆境脅迫相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子11
• 1.2 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展11-18
• 1.2.1 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的演變11-12
• 1.2.2 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點12-13
• 1.2.3 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的功能13-17
• 1.2.4 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的作用機(jī)制17-18
• 1.2.5 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控機(jī)制18
• 1.3 研究的目的和意義18-19
• 2. 材料與方法19-28
• 2.1 植物材料19
• 2.2 試劑與儀器19-20
• 2.2.1 主要儀器設(shè)備19
• 2.2.2 主要分子生物學(xué)和化學(xué)試劑、表達(dá)載體及菌株19
• 2.2.3 實驗中常用培養(yǎng)基和溶液配制19-20
• 2.3 試驗方法20-28
• 2.3.1 取樣20
• 2.3.2 RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄20-22
• 2.3.3 DgWRKY5基因和DgWRKY4基因的分離22-23
• 2.3.4 DgWRKY5基因和DgWRKY4基因表達(dá)載體的構(gòu)建23-24
• 2.3.5 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備24-25
• 2.3.6 重組質(zhì)粒pCAMBIA 2300-DgWRKY5和重組質(zhì)粒pCAMBIA2300-DgWRKY4轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌25
• 2.3.7 將含有DgWRKY5質(zhì)粒的農(nóng)桿菌通過介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化到菊花中25-26
• 2.3.8 將含有DgWRKY4質(zhì)粒的農(nóng)桿菌通過介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化到煙草中26-27
• 2.3.9 轉(zhuǎn)DgWRKY5基因菊花和轉(zhuǎn)DgWRKY4基因煙草的檢測27-28
• 2.3.10 轉(zhuǎn)基因菊花植株抗鹽性的初步分析28
• 2.3.11 轉(zhuǎn)基因煙草T0代植株表型觀察和抗鹽性初步分析28
• 2.3.12 菊花葉片葉綠素含量測定28
• 3. 結(jié)果與分析28-38
• 3.1 菊花DgWRKY5基因和DgWRKY4基因的分離及DgWRKY5基因和DgWRKY4基因的進(jìn)化關(guān)系分析28-34
• 3.2 DgWRKY5過量表達(dá)菊花植株的抗鹽性分析34-37
• 3.3 DgWRKY4過量表達(dá)煙草植株的表型及抗鹽性分析37-38
• 4. 討論與結(jié)論38-40
• 4.1 討論38-39
• 4.2 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 致謝45

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 田效琴;菊花DgWRKY5及DgWRKY4基因的克隆和功能鑒定[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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本文編號：1057679