本文關(guān)鍵詞：雙抗夾心ELISA檢測轉(zhuǎn)Bar基因抗除草劑大豆

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【摘要】：為快捷有效地檢測轉(zhuǎn)Bar基因抗除草劑大豆,利用已制備的抗除草劑Bar基因編碼蛋白,膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)單克隆抗體和多克隆抗體,建立PAT蛋白雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測方法,對轉(zhuǎn)Bar基因抗除草劑大豆不同組織材料進行定量檢測。結(jié)果顯示,最佳檢測條件為捕獲抗體質(zhì)量濃度0.125μg/m L,包被酶標板,37℃孵育1 h后4℃靜置過夜,檢測樣品37℃孵育1.5 h,檢測抗體質(zhì)量濃度6.25μg/m L,37℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低檢測限為0.04 ng/m L,大豆蛋白體系中為8 ng/m L;重復(fù)性變異系數(shù)小于3%。利用上述檢測條件,對實驗建立的轉(zhuǎn)Bar基因抗除草劑大豆進行PAT蛋白定量檢測,成功地在根、莖、花、葉、種子不同部位檢測到該蛋白的表達。
【作者單位】： 吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所東北作物有害生物綜合治理重點實驗室吉林省農(nóng)業(yè)微生物重點實驗室;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： Bar 雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附 大豆 檢測
【基金】：吉林省自然科學(xué)基金項目(20130101089JC) 吉林省中青年科技領(lǐng)軍人才及優(yōu)秀創(chuàng)新團隊項目(20121812) 國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(2014ZX08004)
【分類號】：S565.1
【正文快照】： 草丁膦是一種低毒除草劑,其有效成分為膦絲值對應(yīng)的PAT蛋白單克隆抗體或組合為捕獲抗體。檢測菌素(phosphinothricin,PPT),Bar基因為抗除草抗體為實驗室已制備保存的PAT蛋白兔源多克隆抗體,劑基因,編碼膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶(phosphinothricin根據(jù)方陣滴度法確定捕獲抗體和檢測抗，

本文編號：1057298