本文關(guān)鍵詞：降鈣素基因相關(guān)肽在脊髓損傷后引導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:人臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)被應(yīng)用于治療多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病,包括脊髓損傷(Spinal cord injury,SCI)。然而,引導(dǎo)其在SCI后歸巢的關(guān)鍵趨化因子并不明確。降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)在SCI后表達(dá)上調(diào)并大量釋放,本研究旨在探索CGRP引導(dǎo)HUNSCs歸巢到脊髓損傷部位的機(jī)制。方法:以培養(yǎng)基中添加等量PBS處理的HUMSCs作為對(duì)照,體外利用Boyden Chamber和Dunn Chamber裝置,檢測(cè)10-9-10-6 mol/L CGRP對(duì)HUMSCs跨膜趨化性遷移的作用。采用CCK-8法,AnnexinV-FITC凋亡實(shí)驗(yàn)和免疫熒光染色分別觀察CGRP對(duì)細(xì)胞增殖,存活和分化的影響。免疫印跡法分析PI3K/Akt和MAPK信號(hào)通路的在HUMSCs向CGRP趨化性遷移過(guò)程中的激活情況。隨后,建立大鼠T9脊髓橫斷和鉗夾模型,ELISA技術(shù)分析0~14天內(nèi)脊髓組織中CGRP的含量變化。SCI建模后第3天腰椎穿刺術(shù)移植HUMSCs,同時(shí)分別在橫斷模型損傷處持續(xù)注射0.1mol/L PBS,10-6 mol/L CGRP 8-37或10-6 mol/L CGRP,7天后免疫組化染色對(duì)細(xì)胞在脊髓中的分布情況進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)。結(jié)果:不同濃度CGRP均引起HUMSCs發(fā)生跨膜趨化性遷移,其中,10-6 mol/L CGRP具有最高的效率(1.81±0.13倍)。動(dòng)態(tài)延時(shí)拍攝技術(shù)揭示,CGRP的刺激改變了細(xì)胞遷移的軌跡和方向(CMI),指導(dǎo)HUMSCs發(fā)生趨向性運(yùn)動(dòng);提高其運(yùn)動(dòng)速度和遷移效率(FMI),可使細(xì)胞完成CGRP引發(fā)的趨化性遷移。在體外CGRP不影響HUMSCs增殖和凋亡,卻可以促進(jìn)經(jīng)神經(jīng)誘導(dǎo)10天的HUMSCs表達(dá)MAP2,MBP和Nestin。CGRP導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Akt和p38MAPK的磷酸化水平增高,而抑制這兩條信號(hào)通路能夠顯著降低CGRP引導(dǎo)的細(xì)胞趨化性遷移作用。T9損傷后2 h損傷節(jié)段中CGRP含量即迅速升高,且在兩周內(nèi)其含量一直維持在較高水平。同鉗夾組(19.38±3.7個(gè)/層)比較,橫斷組中HUMSCs表現(xiàn)出歸巢傾向(158.1±8.6個(gè)/層)。于橫斷處持續(xù)注射PBS,CGRP 8-37和CGRP后,HUMSCs歸巢數(shù)分別為:158.1±8.6,88.07±6.1,205.3±9.2(個(gè)/層),CGRP 8-37能夠顯著減少歸巢細(xì)胞數(shù)(P0.01)。結(jié)論:CGRP可以與HUMSCs表面的CGRP受體結(jié)合,激活A(yù)kt和p38MAPK信號(hào)通路從而誘導(dǎo)HUMSCs進(jìn)行趨化性遷移。脊髓損傷后,CGRP的分泌釋放能夠引導(dǎo)移植的HUMSCs定位到損傷部位更好地發(fā)揮作用。CGRP可以作為一種模式分子用于后續(xù)研究,以增加遷移到損傷部位的細(xì)胞數(shù)量,使治療性的HUMSCs更好的發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞遷移 降鈣素基因相關(guān)肽 脊髓損傷
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R651.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-11
• 材料與方法11-20
• 結(jié)果20-30
• 討論30-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 結(jié)論37-38
• 綜述38-46
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表及待發(fā)表的論文46-47
• 主要詞匯中英文縮寫(xiě)表47-48
• 本課題所獲基金資助48-49
• 致謝49-50

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