本文關(guān)鍵詞：基因敲除質(zhì)粒載體的構(gòu)建及其在幽門螺桿菌基因敲除中的應(yīng)用

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【摘要】：目的構(gòu)建用于幽門螺桿菌(helicobacter pylori,Hp)同源重組雙交換基因敲除的質(zhì)粒載體,實現(xiàn)Hp內(nèi)基因的快速敲除。方法以質(zhì)粒pLYL03為骨架,重新排列質(zhì)粒上的基因元件以減少冗余序列,用卡那霉素抗性基因(aphA)替換原質(zhì)粒上的紅霉素抗性基因作為抗性篩選標(biāo)記,在抗性篩選標(biāo)記兩端構(gòu)建多克隆位點用于同源重組同源臂的插入,由此構(gòu)建用于Hp同源重組雙交換基因敲除的質(zhì)粒載體pSJHK。以質(zhì)粒pSJHK為載體構(gòu)建hp0169基因的同源重組雙交換敲除質(zhì)粒pSJHK-0169,通過電擊轉(zhuǎn)化方法將敲除質(zhì)粒pSJHK-0169轉(zhuǎn)入Hp中,用卡那霉素篩選轉(zhuǎn)化子。結(jié)果以質(zhì)粒pLYL03為基礎(chǔ)構(gòu)建用于Hp同源重組雙交換基因敲除的質(zhì)粒載體pSJHK,大小4 371bp。以基因hp0169作為目標(biāo)基因構(gòu)建同源重組雙交換敲除質(zhì)粒pSJHK-0169,經(jīng)電擊轉(zhuǎn)化Hp中,獲得卡那霉素抗性陽性轉(zhuǎn)化子,測序確證基因敲除成功。結(jié)論構(gòu)建的基因敲除質(zhì)粒載體pSJHK實現(xiàn)了對Hp中目標(biāo)基因的敲除,為Hp新基因功能研究和致病因子的發(fā)掘提供了有效的基因操作工具。
【作者單位】： 濱州醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 幽門螺桿菌 基因敲除 質(zhì)粒 同源重組
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金項目(No.81471561,81501718) 山東省自然科學(xué)基金培養(yǎng)基金項目(No.ZR2015PC021,ZR2014CP020) 濱州醫(yī)學(xué)院科技計劃項目(No.BY2014KJ01);濱州醫(yī)學(xué)院校級科研啟動基金項目(No.BY2014KYQD10,BY2014KYQD11)
【分類號】：R378
【正文快照】： ***幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)是一種特異性寄生于人胃黏膜的革蘭陰性微需氧菌。研究表明,Hp感染是慢性胃炎、胃潰瘍和十二指腸潰瘍等胃腸道疾病發(fā)生的重要病因,并與胃癌、胃粘膜相關(guān)淋巴樣組織(MALT)淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)[1-3]。1994年,世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機

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本文編號：1050361