本文關(guān)鍵詞：編碼基因完整的偽狂犬病毒細(xì)菌人工染色體的構(gòu)建

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【摘要】：為了構(gòu)建包含偽狂犬病毒(PRV)完整編碼基因的細(xì)菌人工染色體(BAC),首先對(duì)PRV基因組進(jìn)行了分析,確定了單一酶切位點(diǎn)AcclⅠ,用PCR方法擴(kuò)增出上下游同源臂、EGFP表達(dá)盒并同BAC質(zhì)粒一起克隆到p UC_(18)質(zhì)粒,獲得轉(zhuǎn)移載體;將經(jīng)限制性內(nèi)切酶AcclⅠ處理過(guò)的病毒全基因組連同轉(zhuǎn)移載體共同轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞,獲得重組病毒;利用PCR檢測(cè)、電鏡觀察及生長(zhǎng)曲線測(cè)定對(duì)野毒與重組毒的基本特性進(jìn)行了比較。結(jié)果表明:重組病毒可以穩(wěn)定地表達(dá)綠色熒光,BAC在傳代過(guò)程中能夠穩(wěn)定存在;重組病毒在電鏡下的形態(tài)與野毒未見(jiàn)差異,其生長(zhǎng)曲線也基本同野毒吻合。說(shuō)明成功構(gòu)建的編碼基因完整的PRV細(xì)菌人工染色體可用于該病毒的結(jié)構(gòu)生物學(xué)及致病機(jī)理研究。
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 偽狂犬病毒(PRV) 細(xì)菌人工染色體(BAC) 完整結(jié)構(gòu)基因組 重組病毒 EGFP
【基金】：國(guó)家科技重大專項(xiàng)人獸共患病病原譜流行規(guī)律研究(2012ZX10004214)
【分類號(hào)】：S852.65
【正文快照】： 偽狂犬病毒屬于(PRV)皰疹病毒科、α皰疹病毒亞科的豬皰疹病毒Ⅰ型病毒,成熟的病毒粒子由四部分獨(dú)特的結(jié)構(gòu)組成:雙股線狀DNA的核心、二十面體核衣殼、被膜以及外層的囊膜[1]。偽狂犬病毒的基因組為線狀雙鏈DNA,大小約為150 kb,GC含量約為74%,至少含70個(gè)基因,約編碼100種蛋白質(zhì)

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2 林馘，

本文編號(hào)：1050077