發(fā)布時(shí)間：2017-10-15 21:43

  本文關(guān)鍵詞：hGDF-15基因的克隆及原核表達(dá)

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【摘要】：【目的】克隆人生長(zhǎng)分化因子-15(Human growth differentiation factor-15,hGDF-15)成熟肽基因,構(gòu)建其原核表達(dá)載體,并進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),為hGDF-15藥理活性和生物學(xué)功能研究奠定基礎(chǔ)。【方法】利用PCR技術(shù)克隆人hGDF-15成熟肽基因,將其連接到pET-28a載體上構(gòu)建pET-28a-hGDF-15原核表達(dá)載體,并將此載體轉(zhuǎn)入Rosetta(DE3)大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,獲得重組大腸桿菌,對(duì)目的蛋白分別采用不同溫度(16,25,37℃)、IPTG濃度(0.10,0.25,0.50,0.75,1.00mmol/L)和時(shí)間(12,24,36,48h)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳和Western blot檢測(cè),利用Gel Quant Express軟件對(duì)菌體破碎離心的上清組分和沉淀組分中的蛋白含量進(jìn)行測(cè)定,通過(guò)正交試驗(yàn),分析上清組分和沉淀組分的最適誘導(dǎo)表達(dá)條件�！窘Y(jié)果】成功獲得hGDF-15成熟肽基因,其長(zhǎng)度為339bp;構(gòu)建了pET-28a-hGDF-15原核表達(dá)載體,并誘導(dǎo)表達(dá)了hGDF-15蛋白;優(yōu)化的上清組分最適誘導(dǎo)條件為IPTG濃度0.25mmol/L、溫度16℃、時(shí)間24h,沉淀組分最適誘導(dǎo)條件為溫度37℃、時(shí)間36h、IPTG濃度1.00mmol/L�！窘Y(jié)論】成功克隆了hGDF-15基因,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)出其編碼蛋白,并優(yōu)化出了最適誘導(dǎo)表達(dá)條件。
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 生長(zhǎng)分化因子- 原核表達(dá) IPTG濃度 誘導(dǎo)時(shí)間 誘導(dǎo)溫度
【基金】：吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20130101105JC,20140204018YY) 國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計(jì)劃項(xiàng)目 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新基金項(xiàng)目
【分類(lèi)號(hào)】：Q78;Q936
【正文快照】： 生長(zhǎng)分化因子-15(Growth differentiation fac-tor-15,GDF-15),是TGF-β超家族成員,廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織中,在多種病癥(包括炎癥、腫瘤、心血管疾病和肥胖)中扮演多重角色[1]。人GDF-15基因(hGDF-15)編碼序列全長(zhǎng)885bp,由2個(gè)外顯子組成,其中外顯子1由238bp的編碼序列和71bp

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1038907