本文關(guān)鍵詞：大腸桿菌yfiF基因原核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建、表達(dá)條件優(yōu)化及蛋白純化

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【摘要】：[目的]構(gòu)建大腸桿菌功能未知基因yfi F的原核表達(dá)系統(tǒng),對(duì)誘導(dǎo)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,并純化表達(dá)的可溶性Yfi F融合蛋白。[方法]使用p ET16b表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建p ET16b-yfi F原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)Yfi F融合蛋白,對(duì)IPTG加入時(shí)機(jī)、終濃度及誘導(dǎo)時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化,并使用鎳柱純化裂菌上清液中的可溶性Yfi F融合蛋白。[結(jié)果]構(gòu)建了p ET16b-yfi F重組質(zhì)粒,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)Yfi F融合蛋白,最佳誘導(dǎo)條件為細(xì)菌生長(zhǎng)至OD600值為1時(shí)加入IPTG,終濃度為0.1 mmol/L,誘導(dǎo)9 h。裂菌上清液中的可溶性Yfi F融合蛋白純化后濃度為209μg/ml。[結(jié)論]成功構(gòu)建了yfi F的原核表達(dá)系統(tǒng),優(yōu)化了誘導(dǎo)表達(dá)條件,可溶性Yfi F融合蛋白得到純化。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;內(nèi)蒙古民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： yfiF基因 pETb質(zhì)粒 原核表達(dá) 蛋白純化
【分類(lèi)號(hào)】：Q78
【正文快照】： 大腸桿菌細(xì)胞的擬核有1個(gè)DNA分子,長(zhǎng)度約為4.7 Mbp,在DNA分子上分布著大約4 400個(gè)基因,每個(gè)基因的平均長(zhǎng)度約為1 000 bp。隨著研究的不斷深入,很多基因的功能和作用機(jī)制已經(jīng)明確,但是仍然有一些基因的功能和作用機(jī)制還不清楚。大腸桿菌yfi F基因是一個(gè)功能未知的基因,它所編碼

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8 李p，

本文編號(hào)：1030779