本文關(guān)鍵詞：利用CRISPR系統(tǒng)介導(dǎo)人類mir-505基因位點(diǎn)的編輯

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【摘要】：目的:通過(guò)針對(duì)人源mir-505基因,設(shè)計(jì)不同sgRNA,從而利用CRIPSR系統(tǒng)對(duì)mir-505基因位點(diǎn)進(jìn)行編輯,并探討CRISPR系統(tǒng)對(duì)靶點(diǎn)的剪切效率的影響因素。方法:針對(duì)人源mir-505基因設(shè)計(jì)兩條具有不同GC%的sgRNA,隨后分別將其構(gòu)建入41824-sgRNA表達(dá)載體和42230-Cas9蛋白/sgRNA共表達(dá)載體,并將表達(dá)載體利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染入人類細(xì)胞,通過(guò)T7E1assay檢測(cè)不同CRISPR系統(tǒng)對(duì)靶點(diǎn)剪切效率的影響。結(jié)果:對(duì)靶點(diǎn)的剪切與Cas9蛋白和sgRNA的劑量成正比;當(dāng)sgRNA與Cas9蛋白共傳遞時(shí),也能夠明顯提高靶點(diǎn)的剪切效率;而較低的sgRNA的GC%會(huì)降低其對(duì)靶點(diǎn)的剪切效率。結(jié)論:本研究利用CRISPR系統(tǒng)靶向人源細(xì)胞的mir-505基因,使得mir-505基因發(fā)生突變。CRISPR系統(tǒng)對(duì)靶點(diǎn)的剪切效率和sgRNA和Cas9蛋白的劑量、sgRNA是否和Cas9蛋白共傳遞以及sgRNA的GC%有關(guān)。
【作者單位】： 東華大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)研究所;
【關(guān)鍵詞】： CRISPR系統(tǒng) Mir- SgRNA TE assay 剪切效率
【基金】：中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)專項(xiàng)資金(13D110521)
【分類號(hào)】：Q78
【正文快照】： Chinese Library Classification(CLC):Q291;R-33 Document code:AArticle ID:1673-6273(2016)02-257-04前言CRISPR被發(fā)現(xiàn)是一種細(xì)菌和古生菌的免疫系統(tǒng)[1-3],由一列短小的保守重復(fù)序列被具有相似大小的獨(dú)特的DNA序列所間隔,一種獨(dú)特的DNA序列叫做間隔區(qū),這些間隔區(qū)通常來(lái)源于

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1030077