本文關(guān)鍵詞：玫煙色棒束孢致病相關(guān)基因的差異表達(dá)研究

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【摘要】：玫煙色棒束孢(Isaria fumosorosea)是國內(nèi)外生物防治中應(yīng)用廣泛的昆蟲病原真菌之一,在小菜蛾的防治中發(fā)揮著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)室篩選到一株對小菜蛾具有高致病力的玫煙色棒束孢菌株IFCF01。為了能夠更深入了解玫煙色棒束孢對小菜蛾的致病機(jī)理、充分發(fā)揮該菌株的應(yīng)用潛力,本研究采用熒光定量PCR技術(shù)對玫煙色棒束孢侵染小菜蛾過程中的8個潛在致病基因的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測,推斷不同基因在侵染過程中的作用。主要結(jié)果分述如下:在玫煙色棒束孢侵染致病小菜蛾的前期,與致病相關(guān)的基因?yàn)?第三類幾丁質(zhì)酶基因(ChiAⅢ)、L-絲氨酸脫水酶基因(L-Ser)、類脂滴蛋白酶基因(MPL-1)。結(jié)果表明:(1)ChiAⅢ基因在菌侵染小菜蛾后的第12 h、30 h、36 h的基因表達(dá)量顯著高于對照中的表達(dá)量,在菌侵染小菜蛾后的第5 d、10 d基因的表達(dá)量顯著的低于對照。(2)L-Ser基因在菌侵染小菜蛾后的第12 h的基因表達(dá)量顯著高于對照和其他時間點(diǎn)的表達(dá)量。(3)MPL-1基因在菌侵染小菜蛾后的第12 h的基因表達(dá)量顯著高于對照和其他時間點(diǎn)的表達(dá)量,除侵染后第12 h外,該基因在其他的處理時間點(diǎn)均呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)。在玫煙色棒束孢侵染致病小菜蛾的后期,與致病相關(guān)的基因有:cAMP依賴性蛋白激酶調(diào)節(jié)亞基基因(PK)、類馬鈴薯糖蛋白磷脂酶基因(PLP)、腺苷酸環(huán)化酶基因(ADC)、MAP激酶激活因子基因(MAPKK)、Mmc蛋白基因(Mmc)。結(jié)果表明:(1)Mmc基因在菌侵染小菜蛾的過程中,除侵染后第15 d,其余的各個時間點(diǎn)的基因表達(dá)量與對照相比均呈現(xiàn)為上調(diào)表達(dá),其中,第24 h、30 h、36 h、10 d的表達(dá)量顯著高于對照和其他時間點(diǎn)的表達(dá)量。(2)ADC基因在菌侵染小菜蛾后第12 h、24 h、30 h和36 h該基因呈現(xiàn)出下調(diào)表達(dá),表達(dá)量均低于對照;該基因在菌侵染小菜蛾后第5 d、10 d、15 d呈現(xiàn)出上調(diào)表達(dá),且基因表達(dá)量顯著高于對照。(3)PLP基因在玫煙色棒束孢侵染小菜蛾后首先呈現(xiàn)出與對照表達(dá)量相似的穩(wěn)定表達(dá),直到侵染后第10 d和第15 d開始呈現(xiàn)出上調(diào)表達(dá),該基因表達(dá)量在以上兩個時間點(diǎn)均顯著高于對照。(4)PK基因在玫煙色棒束孢侵染小菜蛾后第12 h、24 h、30 h和36 h呈現(xiàn)出下調(diào)表達(dá),表達(dá)量均低于對照;在菌侵染小菜蛾后第5 d、10 d、15 d該基因呈現(xiàn)出上調(diào)表達(dá)且基因表達(dá)量均顯著高于對照。(5)MAPKK基因在玫煙色棒束孢侵染小菜蛾的過程中始終是下調(diào)表達(dá)的,其中,除菌侵染小菜蛾后第15 d以外,其余時間點(diǎn)的基因表達(dá)量均顯著低于對照。綜上所述,本研究所選的8個玫煙色棒束孢潛在致病相關(guān)基因在真菌侵染致病小菜蛾過程中,除MAPKK基因表達(dá)量在整個侵染過程中的各個階段相對于對照均下調(diào)表達(dá)外,其余7個基因的表達(dá)量均在真菌侵染致病的不同階段有著顯著的上調(diào)表達(dá)。其中,ChiAⅢ基因、L-Ser基因和MPL-1基因的表達(dá)量均在真菌侵染小菜蛾后第12 h顯著高于對照,表明這三個基因參與并作用于玫煙色棒束孢對小菜蛾侵染致病前期的體壁入侵階段;PK基因、PLP基因、ADC基因和Mmc基因的表達(dá)量在玫煙色棒束孢侵染致病小菜蛾后期(5 d、10 d、15 d)相對于對照顯著高表達(dá),表明這四個基因參與并作用于玫煙色棒束孢對小菜蛾的侵染致病后期的體內(nèi)定殖及致死階段。
【關(guān)鍵詞】：玫煙色棒束孢 小菜蛾 致病相關(guān)基因 熒光定量檢測
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S476.12
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 縮略詞8-12
• 1 前言12-19
• 1.1 概述12-13
• 1.2 昆蟲病原真菌致病機(jī)制研究概況13-14
• 1.3 玫煙色棒束孢致病機(jī)制研究進(jìn)展14-16
• 1.3.1 玫煙色棒束孢的入侵機(jī)制研究14-15
• 1.3.2 玫煙色棒束孢致病的分子機(jī)制研究15-16
• 1.4 論文研究思路16-18
• 1.4.1 研究的目的和意義16-17
• 1.4.2 研究的主要內(nèi)容17-18
• 1.5 技術(shù)路線18-19
• 2 供試蟲源及菌株熒光定量檢測模板的獲取19-28
• 2.1 材料與方法19-24
• 2.1.1 供試蟲源及菌株19-20
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器20-21
• 2.1.3 主要試劑、耗材21
• 2.1.4 主要培養(yǎng)基21-22
• 2.1.5 主要試劑的配制22
• 2.1.6 RNA的提取及cDNA的合成22-23
• 2.1.7 RNA完整性及濃度檢測23
• 2.1.8 cDNA第一鏈合成23-24
• 2.2 結(jié)果與分析24-27
• 2.2.1 試驗(yàn)樣品總RNA完整性檢測24-25
• 2.2.2 樣品總RNA濃度檢測25-26
• 2.2.3 cDNA合成第一鏈質(zhì)量檢測26-27
• 2.3 小結(jié)27-28
• 3 潛在致病相關(guān)基因的選擇及特異性引物的篩選28-39
• 3.1 材料與方法28-30
• 3.1.1 潛在致病相關(guān)基因28
• 3.1.2 引物設(shè)計(jì)28
• 3.1.3 引物的特異性驗(yàn)證28-30
• 3.2 結(jié)果與分析30-38
• 3.2.1 潛在致病相關(guān)基因篩選30
• 3.2.2 目的基因候選引物30-32
• 3.2.3 引物特異性驗(yàn)證32-38
• 3.3 小結(jié)38-39
• 4 玫煙色棒束孢入侵階段潛在致病相關(guān)基因差異表達(dá)驗(yàn)證39-43
• 4.1 材料與方法39-40
• 4.1.1 供試蟲源及菌株39
• 4.1.2 玫煙色棒束孢內(nèi)參基因39
• 4.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備39
• 4.1.4 潛在致病相關(guān)基因的熒光定量PCR檢測39-40
• 4.1.5 數(shù)據(jù)處理與分析40
• 4.2 結(jié)果與分析40-42
• 4.2.1 目的基因標(biāo)準(zhǔn)曲線40
• 4.2.2 玫煙色棒束孢入侵階段潛在致病相關(guān)基因表達(dá)情況40-42
• 4.3 小結(jié)42-43
• 5 玫煙色棒束孢定殖及致死階段潛在致病相關(guān)基因差異表達(dá)驗(yàn)證43-48
• 5.1 材料與方法43
• 5.1.1 供試蟲源及菌株43
• 5.1.2 玫煙色棒束孢內(nèi)參基因43
• 5.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備43
• 5.1.4 潛在致病相關(guān)基因的熒光定量PCR檢測43
• 5.1.5 數(shù)據(jù)處理與分析43
• 5.2 結(jié)果與分析43-46
• 5.2.1 目的基因標(biāo)準(zhǔn)曲線43
• 5.2.2 玫煙色棒束孢定殖及致死階段致病相關(guān)基因的表達(dá)情況43-46
• 5.3 小結(jié)46-48
• 6結(jié)論與討論48-54
• 6.1 結(jié)論48
• 6.2 討論48-54
• 6.2.1 參與玫煙色棒束孢侵染致病小菜蛾前期基因的功能分析48-50
• 6.2.2 參與玫煙色棒束孢侵染致病小菜蛾后期基因的功能分析50-53
• 6.2.3 有待于進(jìn)一步研究的內(nèi)容53-54
• 致謝54-55
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 附錄60-62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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本文編號：1024250