本文關(guān)鍵詞：破囊壺菌脂肪酶基因的克隆、雙溫控自誘導(dǎo)表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究

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【摘要】：【目的】克隆破囊壺菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW7的脂肪酶基因,實現(xiàn)其在大腸桿菌細(xì)胞中異源高效表達(dá),并進(jìn)行初步酶學(xué)性質(zhì)研究�！痉椒ā炕谵D(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)注釋,獲得脂肪酶基因lip,構(gòu)建重組基因工程菌Rosetta(DE3)/p ET30-lip,利用雙溫控自誘導(dǎo)方法高效表達(dá)蛋白,表達(dá)產(chǎn)物(LIP)經(jīng)Ni-Agarose His親和層析柱純化后進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究�！窘Y(jié)果】從Aurantiochytrium sp.PKU#SW7中克隆得到一個大小為873 bp的脂肪酶基因(Gen Bank登錄號為KT305964),該酶對p-NPB最適反應(yīng)溫度和pH分別為40°C和8.0。以不同濃度的金屬離子Ca~(2+)和Co~(2+)溶液分別保溫處理酶液30 min可使酶活提高1.3倍左右;甲醇對脂肪酶的抑制作用不明顯。在最適反應(yīng)條件下對p-NPP與p-NPB的酶活力分別為70.0±3.1 U/mg和102.5±2.6 U/mg�！窘Y(jié)論】Aurantiochytrium sp.PKU#SW7脂肪酶具有良好的特性,符合生物柴油生物催化劑基本要求。
【作者單位】： 北京大學(xué)環(huán)境與能源學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 破囊壺菌 脂肪酶 雙溫控自誘導(dǎo)表達(dá)
【基金】：海洋公益性行業(yè)科研專項經(jīng)費項目(No.201305022) 國家外國青年專家基金項目(No.31450110424) 中國博士后科學(xué)基金項目(No.2014M560855) 深圳市海外高層次人才創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)專項基金項目(No.KQCX201405211502553)~~
【分類號】：Q78;Q936
【正文快照】： 脂肪酶(Lipase,EC3.1.1.3)屬于羧基酯水解酶類,α/β折疊水解酶超家族。脂肪酶廣泛存在于人、動植物、微生物體中。由于微生物脂肪酶具有種類繁多、底物專一性類型多、產(chǎn)量可控性強、易分離純化以及便于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點,成為國內(nèi)外的研究熱點。Hasan等[1]研究發(fā)現(xiàn),微生物界可

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本文編號：1010023