隨著蛋白質(zhì)組學(xué)與生命科學(xué)研究的飛速發(fā)展,相關(guān)分析與檢測(cè)技術(shù)越來(lái)越得到研究者們的重視。其中,質(zhì)譜分析技術(shù)因其高通量和可精確定量等特性而成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究中不可或缺的工具。作為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的一個(gè)重要內(nèi)容,巰基翻譯后修飾因其與許多疾病如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病等的密切聯(lián)系而受到廣泛關(guān)注,針對(duì)它的質(zhì)譜定量技術(shù)也是一個(gè)非�；钴S的研究領(lǐng)域,在生命科學(xué)領(lǐng)域扮演著越來(lái)越重要的角色。本論文將介紹相關(guān)研究背景以及我們?cè)诤瑤�基的多肽質(zhì)譜定量技術(shù)研究中所做得努力,具體工作主要有以下兩方面:一、發(fā)展了一種新的標(biāo)記定量方法用于含巰基的半胱氨肽相對(duì)與絕對(duì)定量分析。所選用的兩種化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的標(biāo)記物N-甲基馬來(lái)酰亞胺(NMM)與N-乙基馬來(lái)酰亞胺(NEM)可以通過(guò)邁克爾加成反應(yīng)特異性的標(biāo)記巰基。這種反應(yīng)快速,高靈敏,高特異性,并且可以在溫和的反應(yīng)條件下進(jìn)行。由于化學(xué)結(jié)構(gòu)的微小差異,這種技術(shù)無(wú)論在相對(duì)還是絕對(duì)定量模式下都能提供可靠的定量結(jié)果。并且,這種方法可以對(duì)幾乎所有含巰基的多肽及其它生物分子進(jìn)行高靈敏檢測(cè),絕對(duì)定量檢測(cè)極限可達(dá)納摩爾濃度數(shù)量級(jí),且可對(duì)復(fù)雜的蛋白質(zhì)酶解液進(jìn)行標(biāo)記定量。與傳統(tǒng)的同位素試劑盒相比,試劑成本幾乎...

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 巰基翻譯后修飾與質(zhì)譜技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.1.1 巰基翻譯后修飾的分類及其生物學(xué)意義
        1.1.2 巰基亞硝基化修飾水平的檢測(cè)方法
        1.1.3 質(zhì)譜技術(shù)簡(jiǎn)介
    1.2 定量蛋白質(zhì)組學(xué)及其應(yīng)用
        1.2.1 定量蛋白質(zhì)組學(xué)基本概念與在生物領(lǐng)域中的應(yīng)用
        1.2.2 常用的質(zhì)譜標(biāo)記定量方法概述
        1.2.3 非同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)定量法
    1.3 細(xì)胞凋亡酶-3及其活性檢測(cè)
        1.3.1 細(xì)胞凋亡酶-3簡(jiǎn)介
        1.3.2 細(xì)胞凋亡酶-3活性檢測(cè)的生物學(xué)意義
        1.3.3 常見(jiàn)的酶活性檢測(cè)方法
    1.4 質(zhì)譜技術(shù)在酶活性檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.4.1 MALDI質(zhì)譜在酶活性檢測(cè)中的應(yīng)用
        1.4.2 其它質(zhì)譜技術(shù)在酶活性檢測(cè)中的應(yīng)用
    1.5 本研究課題的選題依據(jù)
    參考文獻(xiàn)
第二章 基于雙馬來(lái)酰亞胺標(biāo)記技術(shù)的半胱氨肽相對(duì)和絕對(duì)定量法
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
            2.2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 半胱氨肽的選擇性標(biāo)記
        2.2.3 標(biāo)記效率的測(cè)定
        2.2.4 標(biāo)記反應(yīng)的動(dòng)態(tài)范圍
        2.2.5 半胱氨肽相對(duì)和絕對(duì)定量
        2.2.6 復(fù)雜背景下的定量穩(wěn)定性裝與蛋白樣品的富集
        2.2.7 含有半胱氨酸的蛋白質(zhì)酶解組裝與蛋白樣品的富集
        2.2.8 MALDI-TOF分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.3.1 設(shè)計(jì)策略
        2.3.2 半胱計(jì)策氨肽的特異性標(biāo)記
        2.3.3 標(biāo)記反應(yīng)條件優(yōu)化
        2.3.4 標(biāo)記效率和靈敏度
        2.3.5 比值測(cè)定的可重復(fù)性
        2.3.6 半胱氨肽的絕對(duì)定量
        2.3.7 半胱氨肽相對(duì)定量
        2.3.8 含半胱氨酸蛋白的相對(duì)定量
    2.4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 雙馬來(lái)酰亞胺標(biāo)記定量法在細(xì)胞凋亡酶-3活性檢測(cè)中的應(yīng)用
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
            3.2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            3.2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 多肽酶活性質(zhì)譜探針的制備
        3.2.3 多肽探針的酶切反應(yīng)及酶特異性檢測(cè)
        3.2.4 體外酶活性檢測(cè)與抑制劑篩選
        3.2.5 細(xì)胞裂解液中的酶活性檢測(cè)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論
        3.3.1 多肽酶活性質(zhì)譜探針的制備
        3.3.2 雙馬來(lái)酰亞胺標(biāo)記定量法在Caspase-3酶活性檢測(cè)中的應(yīng)用
        3.3.3 體外酶活性檢測(cè)與抑制劑篩選
        3.3.4 細(xì)胞裂解液中的酶活性檢測(cè)
    3.4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
碩士期間發(fā)表的論文和專利
致謝



本文編號(hào)：3827628