目前,小分子熒光傳感器是化學(xué)、生命科學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)等學(xué)科及其交叉學(xué)科的研究熱點,這是因為小分子熒光傳感器具有合成過程簡便、成本低廉、能實現(xiàn)識別手段多樣化等優(yōu)點。而且研究人員在利用生物熒光傳感器進行測試過程中操作容易,樣品不需要進行繁瑣的預(yù)處理,能對被檢測物進行實時原位監(jiān)測,同時可以很容易穿透細胞,可以實現(xiàn)對手術(shù)前后癌細胞和患癌組織進行成像跟蹤,因此具有很好的生物應(yīng)用前景。本文通過設(shè)計合成兩種基于分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移機制（ICT）的萘酰亞胺類熒光探針,分別實現(xiàn)了對人體生物酶和小分子活性氮（RNS）的定量檢測。（1）我們通過合理設(shè)計,合成了一種基于分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移（ICT）機制的糜蛋白酶（CHT）熒光探針。該探針以1,8-萘酰亞胺作熒光母體,引入4-溴丁醜基構(gòu)建了比率熒光探針NI-1。4-溴丁�；兄p重功能:模擬多肽的底物識別糜蛋白酶和減弱熒光團的ICT效應(yīng)。當引入4-溴丁�；�,探針分子中的羥基被保護起來,減弱了 ICT效應(yīng),熒光發(fā)射在450 nm處,當存在糜蛋白酶時,酶催化裂解酯鍵,釋放出熒光團上的羥基,熒光發(fā)射紅移至550 nm,發(fā)出強烈熒光,顯著改變了探針的光物理特性,具有較大的Stoke... 

【文章來源】：福州大學(xué)福建省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＮＩ－ｌ與ＣＨＴ的光譜分析圖：（Ａ）在ｐＨ為８．０的ＨＥＰＥＳ緩沖溶液中，１０?ｎＭ的??ＮＩ－１與ＣＨＴ?（１０?ｎｇ／ｍＬ）于３０°Ｃ反應(yīng)３０?ｍｉｎ前（ａ）后（ｂ）的紫外光譜圖；（Ｂ）在ｐＨ??

Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）?Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ?（ｎｍ）??圖２－２在ｐＨ＝８．０的ＨＥＰＥＳ緩沖溶液中，加入了?ＣＨＴ?（１０噸／ｍＬ）的體系中在３０°Ｃ下紫??夕卜（Ａ）和熒光（Ｂ）隨時間變化光譜。（、ｘ＝３８５ｎｍ，ｓｌｉｔ：?１０ｎｍ／１０ｎｍ，ＰＭＴＶｏｌｔｓ：５８０）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｔｉｍｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ?（Ａ）?ａｎｄ?ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?（Ｂ）?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ＮＩ－１?（１０??｜ｉＭ）?ｉｎ?ＨＥＰＥＳ?ｂｕｆｆｅｒ?（１００?ｍＭ，?ｐＨ?８．０）?ｕｐｏｎ?ａｄｄｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ＣＨＴ?（１０?｜ｉｇ／ｍＬ）?ｏｖｅｒ?ｔｈｅ?ｃｏｕｒｓｅ?ｏｆ?３０??ｍｉｎ?ｕｎｄｅｒ?３０°Ｃ．?（＾ｅＸ＝?３８５?ｎｍ，?ｓｌｉｔ：?１０?ｎｍ／１０?ｎｍ，?ＰＭＴ?Ｖｏｌｔｓ：?５８０）??實驗中考察了探針在加入ＣＨＴ前后的紫外和熒光光譜變化情況。Ｆｉｇｕｒｅ??２－２Ａ是加入ＣＨＴ?（１０?ｐｇ／ｍＬ）前后體系在３０?ｍｉｎ內(nèi)紫外光譜變化圖，從圖中可??以看出，反應(yīng)時間為０?ｍｉｎ時（加入ＣＨＴ前），在３５０?ｎｍ處有最大吸收峰。加??入ＣＨＴ之后，在４５０?ｎｍ處出現(xiàn)新的紫外吸收峰，與Ｆｉｇｕｒｅ?２－１實驗測試得到??的紫外光譜結(jié)果一致。且隨著反應(yīng)時間的延長，反應(yīng)體系在３５０?ｎｍ處吸收強?？??度逐漸減小

ｐＨ?Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?（°Ｃ）??圖２－３?（Ａ）不同ｐＨ的緩沖溶液和（Ｂ）不同溫度對ＮＩ－１?（１０?＿）本身（■）及對ＮＩ－１??（１０?ＭＭ）響應(yīng)ＯＮＯＯ＿?（１０?ｍＭ）?（?▲）的影響。結(jié)果表示為三次單獨測量的平均值土標準差。??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?（Ａ）?ｐＨ?ａｎｄ?（Ｂ）?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｒａｔｉｏ?ｏｆ?ＮＩ－１?（１０??｜ｉＭ）?ｗｉｔｈ?（▲）?ａｎｄ?ｗｉｔｈｏｕｔ?（■）?ＣＨＴ?（１０?｝ｉｇ／ｍＬ）．?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ａｒｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ａｓ?ｔｈｅ?ｍｅａｎ?土ｓｔａｎｄａｒｄ??ｄｅｖｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｒｅｅ?ｓｅｐａｒａｔｅ?ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ．?（＾ｃＸ＝?３８５?ｎｍ，?ｓｌｉｔ：?１０?ｎｍ／１０?ｎｍ，?ＰＭＴ?Ｖｏｌｔｓ：?５８０）．??熒光強度明顯增強；當ｐＨ為８．０時，熒光強度比值出現(xiàn)最大值，說明反應(yīng)在堿??性條件更適合，實驗結(jié)果也符合糜蛋白酶本身的最適ｐＨ?７．５？９．０?［９１］。實驗結(jié)果??表明探針ＮＩ－１能夠應(yīng)用在生理環(huán)境下檢測ＣＨＴ。所以ＨＥＰＥＳ緩沖溶液的ｐＨ為??８．０用于以后的實驗中。??由Ｆｉｇｕｒｅ?２－３Ｂ可見，ＮＩ－１在５５０?ｎｍ和４５０?ｎｍ處焚光強度比值也是基本保??持在０．０１左右，說明在探針在該溫度范圍內(nèi)有很好的穩(wěn)定性。向含有ＮＩ－１的反??應(yīng)體系中加入ＣＨＴ后，在２５？４５°Ｃ的溫度范圍內(nèi)，熒光明顯增強。選擇一個適??宜溫度作為反應(yīng)體系的溫度。因此

【參考文獻】：
期刊論文
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