基于超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜系統(tǒng),建立了食品中牛奶過敏原酪蛋白的快速篩查和定量檢測方法。樣品經(jīng)緩沖液提取后,采用5 kD超濾膜去除小分子雜質(zhì),得到蛋白質(zhì)提取液。以數(shù)據(jù)依賴采集（data-dependent acquisition,DDA）方式獲得全掃描質(zhì)譜圖,進(jìn)行蛋白質(zhì)定性確證,以平行反應(yīng)監(jiān)測（parallel reaction monitoring,PRM）技術(shù)對(duì)目標(biāo)特征肽段進(jìn)行定量分析。針對(duì)特征肽段,設(shè)計(jì)并合成了內(nèi)標(biāo)肽和內(nèi)標(biāo)物質(zhì),以降低基質(zhì)效應(yīng)和抵消處理過程中的損失。該方法應(yīng)用于食品中的α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白的快速篩查和定量檢測。結(jié)果表明,該方法在5²50μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,定量限為0.2⁵.5μg/kg,平均回收率在68.8%¹04.4%之間,RSD<6%。該方法可用于果汁飲料、果醬、面包、早餐谷物中牛奶過敏原酪蛋白的快速篩查和定量分析。 

【文章來源】：色譜. 2017,35(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

果汁中酪蛋白特征肽段與合成內(nèi)標(biāo)肽段的色譜圖

剩幔恚?1－Ｈ0．55．510－250Ｙ＝0．047Ｘ＋0．1420．991Ｓ2－Ｆ0．10．55－250Ｙ＝0．031Ｘ＋0．0560．997к－Ｓ0．52．510－250Ｙ＝0．020Ｘ＋0．0860．993β－Ｖ0．051．05－250Ｙ＝0．021Ｘ－0．0170．997ＯａｔｍｅａｌＳ1－Ｈ16．010－250Ｙ＝0．129Ｘ－0．2790．997Ｓ2－Ｆ0．10．55－250Ｙ＝0．026Ｘ－0．0340．998к－Ｓ0．52．510－250Ｙ＝0．019Ｘ－0．0130．997β－Ｖ0．051．05－250Ｙ＝0．037Ｘ＋0．1890．999Ｙ：ｐｅａｋａｒｅａ；Ｘ：ｍａｓｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，μｇ／Ｌ．圖34種酪蛋白特征肽段與合成內(nèi)標(biāo)肽段的線性響應(yīng)Ｆｉｇ．3Ｌｉｎｅａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｆｏｕｒｃａｓｅｉｎｓｉｇｎａｔｕｒｅｐｅｐｔｉｄｅｓａｎｄｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄｐｅｐｔｉｄｅｓ圖44種酪蛋白的酶解濃度隨酶解時(shí)間的變化Ｆｉｇ．4Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｆｏｕｒｔｙｐｅｓｏｆｃａｓｅｉｎｓａｌｏｎｇｗｉｔｈｔｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｔｉｍｅｓ2．4方法的線性關(guān)系、ＬＯＤ和ＬＯＱ在4種樣品中分別找出一個(gè)不含有牛奶的樣品作為空白，采用空白基質(zhì)提取液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，每個(gè)濃度點(diǎn)均加入100μＬ對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)肽段標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。最終肽段Ｓ1－Ｈ和к－Ｓ的質(zhì)量濃度為10、25、50、100和250μｇ／Ｌ；肽段Ｓ2－Ｆ和β－Ｖ的質(zhì)量濃度為5、25、50、100和250μｇ／Ｌ。在空白基質(zhì)提取液中，添加低濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，獲得每個(gè)肽段信噪比（Ｓ／Ｎ）為3時(shí)的質(zhì)量濃度，作為該特征肽段的ＬＯＤ，Ｓ／Ｎ＝10時(shí)的質(zhì)量濃度為ＬＯＱ，結(jié)果見表3。2．5加標(biāo)回收率在4種樣品的提取液中加入標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)和內(nèi)標(biāo)物，根據(jù)蛋白質(zhì)和特征肽段的等物質(zhì)的量

4種酪蛋白的酶解濃度隨酶解時(shí)間的變化

【參考文獻(xiàn)】：
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