發(fā)布時(shí)間：2021-10-26 23:14

　　在細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、代謝凋亡過(guò)程中,每一環(huán)節(jié)都需要生物活性酶的參與。細(xì)胞內(nèi)的小分子活性氧和金屬離子,對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)多種生理活動(dòng)有重要作用。細(xì)胞內(nèi)酶類(lèi)反應(yīng)和小分子物質(zhì)異常,可導(dǎo)致細(xì)胞功能問(wèn)題和疾病風(fēng)險(xiǎn)。研究此類(lèi)物質(zhì),對(duì)于監(jiān)測(cè)細(xì)胞變化和預(yù)防疾病有意義,而作為靈敏度高、專(zhuān)一性強(qiáng)的熒光探針,近年來(lái)在生物化學(xué)和醫(yī)學(xué)方面有廣泛運(yùn)用,成為研究熱點(diǎn)�；谙矘�(shù)堿的藥理作用和熒光特點(diǎn),本文以喜樹(shù)堿衍生物SN-38為熒光團(tuán),設(shè)計(jì)并合成了一個(gè)檢測(cè)偶氮還原酶、靶向識(shí)別低氧腫瘤的熒光探針ARP-1。在輔酶NADH存在時(shí),以DMSO:HEPES（1:9,pH=7.2）為測(cè)試體系記錄了ARP-1的熒光光譜,發(fā)現(xiàn)ARP-1有微弱的藍(lán)色熒光,與大鼠肝微粒體反應(yīng)后在560 nm處發(fā)出綠色熒光。熒光成像實(shí)驗(yàn)證明:ARP-1在低氧狀態(tài)下的細(xì)胞和線蟲(chóng)體內(nèi)能斷鍵釋放出SN-38,并發(fā)出綠色熒光;將探針運(yùn)用于小鼠腫瘤成像實(shí)驗(yàn),結(jié)果證明ARP-1能對(duì)腫瘤特異性標(biāo)記,且在低氧的腫瘤中,探針斷鍵釋放出的藥效團(tuán)SN-38能抑制腫瘤的生長(zhǎng),是一個(gè)選擇性好、靈敏度高的低氧探針�；�1,8-萘酰亞胺結(jié)構(gòu),文中設(shè)計(jì)合成了三個(gè)檢測(cè)過(guò)氧化氫的熒光探針HP1... 

【文章來(lái)源】：云南大學(xué)云南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 緒論
    1.2 熒光探針的結(jié)構(gòu)和響應(yīng)機(jī)理
        1.2.1 熒光探針的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 熒光探針的響應(yīng)機(jī)理
    1.3 偶氮還原酶探針的研究意義及進(jìn)展
    1.4 過(guò)氧化氫探針的研究意義及進(jìn)展
第二章 基于偶氮還原酶/低氧探針的合成和熒光成像研究
    2.1 概論
    2.2 探針?lè)肿拥脑O(shè)計(jì)
        2.2.1 抗癌藥物喜樹(shù)堿衍生物SN-38的研究
        2.2.2 探針?lè)肿拥脑O(shè)計(jì)原理
    2.3 實(shí)驗(yàn)部分
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
        2.3.2 ARP-1的合成路線
        2.3.3 ARP-1與大鼠肝微粒體反應(yīng)的機(jī)理
    2.4 ARP-1的光譜測(cè)試方法
        2.4.1 實(shí)驗(yàn)中相關(guān)溶液的配置
        2.4.2 化合物ARP-1光譜測(cè)試液的配制
        2.4.3 探針ARP-1對(duì)Na2S2O4的熒光滴定測(cè)試
        2.4.4 ARP-1對(duì)Na2S2O4的熒光選擇性測(cè)試
        2.4.5 ARP-1自身,NADH自身,ARP-1與NADH反應(yīng),ARP-1與NADH和大鼠肝微粒體在常氧和低氧下反應(yīng)的熒光光譜測(cè)試
        2.4.6 探針ARP-1對(duì)大鼠肝微粒體的熒光和紫外滴定測(cè)試
    2.5 ARP-1的生物測(cè)試方法
        2.5.1 MTS細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        2.5.2 ARP-1在Hela細(xì)胞中的熒光共聚焦成像
        2.5.3 ARP-1在線蟲(chóng)中的熒光成像
        2.5.4 ARP-1對(duì)腫瘤的特異性標(biāo)記研究
        2.5.5 HIF1α組織免疫熒光標(biāo)記[70]
        2.5.6 ARP-1在體內(nèi)對(duì)腫瘤的治療性研究
    2.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.6.1 ARP-1的光譜性質(zhì)研究
        2.6.2 ARP-1的生物測(cè)試研究
            2.6.2.1 ARP-1的細(xì)胞毒性測(cè)試實(shí)驗(yàn)
            2.6.2.2 ARP-1在Hela細(xì)胞中的熒光成像結(jié)果
            2.6.2.3 ARP-1對(duì)線蟲(chóng)(C.elegans)的熒光成像
            2.6.2.4 ARP-1對(duì)腫瘤的特異性標(biāo)記實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.6.2.5 ARP-1在體內(nèi)對(duì)腫瘤的治療性研究
    2.7 本章小結(jié)
第三章 基于1,8-萘酰亞胺的過(guò)氧化氫熒光探針的合成及性質(zhì)研究
    3.1 概論
    3.2 探針?lè)肿拥脑O(shè)計(jì)原理
    3.3 探針的合成路線
        3.3.1 目標(biāo)化合物9-7的合成
        3.3.2 目標(biāo)化合物HP1的合成
        3.3.3 目標(biāo)化合物6-4的合成
        3.3.4 目標(biāo)化合物2的合成
        3.3.5 目標(biāo)化合物3的合成
        3.3.6 探針與過(guò)氧化氫的反應(yīng)機(jī)理
    3.4 探針對(duì)過(guò)氧化氫識(shí)別的光譜研究
        3.4.1 化合物光譜測(cè)試溶液的配制
        3.4.2 化合物對(duì)過(guò)氧化氫的飽和當(dāng)量滴定
        3.4.3 化合物對(duì)活性氧自由基的選擇性的測(cè)試
        3.4.4 化合物檢測(cè)極限的測(cè)試
        3.4.5 化合物時(shí)間響應(yīng)的測(cè)試
    3.5 化合物HP1的生物測(cè)試
        3.5.1 MTS細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        3.5.2 化合物HP1的細(xì)胞成像
        3.5.3 化合物HP1的線蟲(chóng)成像
    3.6 結(jié)果與討論
        3.6.1 化合物對(duì)過(guò)氧化氫的紫外熒光滴定
        3.6.2 化合物對(duì)活性氧自由基的選擇性的測(cè)試
            3.6.2.1 化合物HP1對(duì)活性氧自由基的選擇性的測(cè)試
            3.6.2.2 化合物2對(duì)活性氧自由基的選擇性的測(cè)試
            3.6.2.3 化合物3對(duì)活性氧自由基的選擇性測(cè)試
        3.6.3 化合物檢測(cè)極限的測(cè)試
        3.6.4 化合物對(duì)過(guò)氧化氫時(shí)間響應(yīng)的測(cè)試
        3.6.5 探針HP1的生物性質(zhì)研究
            3.6.5.1 HP1的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
            3.6.5.2 HP1的細(xì)胞共聚焦成像
            3.6.5.3 HP1的線蟲(chóng)成像
    3.7 本章小結(jié)
第四章 基于刃天青的近紅外過(guò)氧化氫熒光探針的合成及性質(zhì)研究
    4.1 概論
    4.2 探針?lè)肿拥脑O(shè)計(jì)
        4.2.1 熒光團(tuán)刃天青的相關(guān)研究
        4.2.2 探針?lè)肿拥脑O(shè)計(jì)原理
    4.3 實(shí)驗(yàn)部分
        4.3.1 目標(biāo)化合物RHP1的合成
        4.3.2 RHP1與過(guò)氧化氫反應(yīng)的機(jī)理
    4.4 探針RHP1的光譜研究
        4.4.1 化合物光譜測(cè)試液的配制
        4.4.2 化合物RHP1對(duì)過(guò)氧化氫飽和當(dāng)量的滴定
        4.4.3 刃天青,RHP1自身及RHP1與過(guò)氧化氫反應(yīng)后的紫外和熒光光譜測(cè)試
        4.4.4 化合物RHP1對(duì)活性氧自由基的選擇性的測(cè)試
        4.4.5 化合物RHP1檢測(cè)極限的測(cè)試
        4.4.6 化合物RHP1對(duì)過(guò)氧化氫的時(shí)間響應(yīng)
        4.4.7 熒光團(tuán)刃天青和RHP1的pH響應(yīng)
    4.5 RHP1的生物測(cè)試方法
        4.5.1 MTS細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        4.5.2 RHP1在Hi5細(xì)胞中的熒光成像實(shí)驗(yàn)
        4.5.3 RHP1在線蟲(chóng)中的熒光成像實(shí)驗(yàn)
    4.6 結(jié)果與討論
        4.6.1 化合物RHP1對(duì)過(guò)氧化氫的紫外熒光滴定
        4.6.2 刃天青,RHP1自身及RHP1與過(guò)氧化氫反應(yīng)后的紫外和熒光光譜測(cè)試
        4.6.3 化合物RHP1對(duì)活性氧自由基的選擇性的測(cè)試
        4.6.4 化合物RHP1檢測(cè)極限的測(cè)試
        4.6.5 化合物RHP1對(duì)過(guò)氧化氫時(shí)間響應(yīng)的測(cè)試
        4.6.6 刃天青、RHP1及RHP1與過(guò)氧化氫在不同pH中反應(yīng)的熒光光譜
        4.6.7 化合物RHP1的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        4.6.8 細(xì)胞共聚焦成像
        4.6.9 線蟲(chóng)熒光成像
    4.7 本章小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 展望
附錄一：ARP-1的相關(guān)譜圖
附錄二：過(guò)氧化氫探針的相關(guān)譜圖
附錄三：近紅外過(guò)氧化氫探針的相關(guān)譜圖
參考文獻(xiàn)
碩士期間學(xué)術(shù)論文發(fā)表情況
致謝



本文編號(hào)：3460382