鱈魚(yú)通常指鱈形目魚(yú)類(lèi),包含大西洋鱈魚(yú)、太平洋鱈魚(yú)、黑線鱈等經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的重要魚(yú)類(lèi)。在我國(guó),鱈魚(yú)的消費(fèi)量逐年遞增,市售鱈魚(yú)種類(lèi)繁多,其市場(chǎng)價(jià)格也差異懸殊。然而,大多數(shù)鱈魚(yú)被加工制成冷凍魚(yú)片等產(chǎn)品進(jìn)行銷(xiāo)售,而且產(chǎn)品包裝缺乏正確的學(xué)名標(biāo)注。消費(fèi)者難以從外觀上辨別出鱈魚(yú)的真假和所屬種類(lèi),由此造成了鱈魚(yú)市場(chǎng)命名混亂,以次充好的復(fù)雜現(xiàn)狀。因此,急需建立一些快速準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便實(shí)用的檢測(cè)方法應(yīng)用于市售鱈魚(yú)成分的檢測(cè)。本文以鱈科鱈魚(yú)為研究對(duì)象,選擇易與鱈魚(yú)混淆的南極犬牙魚(yú)和異鱗蛇鯖為陰性對(duì)照,采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）體系、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）以及膠體金（AuNPs）比色檢測(cè)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行種類(lèi)鑒定與分析。主要研究結(jié)果如下:1.選擇16S rDNA基因設(shè)計(jì)區(qū)分鱈科和非鱈科魚(yú)類(lèi)的引物,選用線粒體Cytb基因分別設(shè)計(jì)針對(duì)大西洋鱈魚(yú)、太平洋鱈魚(yú)、黑線鱈、南極犬牙魚(yú)以及異鱗蛇鯖的物種特異性引物,建立qPCR體系,對(duì)其進(jìn)行物種鑒定分析。檢測(cè)結(jié)果表明,所建立的qPCR體系具有良好的特異性和重復(fù)性,其中16S rDNA qPCR體系能夠快速有效區(qū)分鱈科與非鱈科物種,5種物種特異性qPCR體系能有效鑒定目... 

【文章來(lái)源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

6SrDNAqPCR體系和物種特異性qPCR體系的絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

18圖2.316SrDNAqPCR體系和物種特異性qPCR體系的相對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2.3Relativequantitativestandardcurvesofspecies-specificand16SrDNAgenesinqPCRassay注：a：混合鱈魚(yú)樣品在16SrDNAqPCR體系中的相對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線；b：混合鱈魚(yú)樣品在物種特異性qPCR體系中的相對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線。GMO：大西洋鱈魚(yú)；GMA：太平洋鱈魚(yú)；MA：黑線鱈；DE：南極犬牙魚(yú)；FL：異鱗蛇鯖。Note:a:Relativequantitativestandardofmixedsamplesin16SrDNAqPCRsystem;b:Relativequantitativestandardcurveofmixedsamplesinaspecies-specificqPCRsystem.GMO:G.morhua;GMA:G.macrocephalus;MA:M.aeglefinus;DE:D.eleginoides;LF:L.flavobrunneum.2.2.6市售鱈魚(yú)及鱈魚(yú)深加工制品的檢測(cè)從當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)購(gòu)得20種鱈魚(yú)產(chǎn)品（其中包括5種深加工制品），采用本研究建立的qPCR體系進(jìn)行物種檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果如表2.4所示，20種檢測(cè)樣品中有14種在16SrDNA體系中顯示陽(yáng)性，表明其確實(shí)屬于鱈科（與產(chǎn)品標(biāo)簽一致）。其中挪威北極鱈（8號(hào)和9號(hào)樣品）是大西洋鱈魚(yú)中的一種，是挪威海產(chǎn)局為了強(qiáng)調(diào)產(chǎn)地和物種另起的商品名稱。2種深加工樣品（1號(hào)和5號(hào)）中出現(xiàn)大西洋鱈魚(yú)和太平洋鱈魚(yú)同時(shí)檢出的現(xiàn)象，由于國(guó)內(nèi)市場(chǎng)中太平洋鱈魚(yú)價(jià)格低于大西洋鱈魚(yú)，說(shuō)明在市售鱈魚(yú)的加工制品中存在以次充好的現(xiàn)象。值得注意的是，3、6、7、11、17、19號(hào)樣品產(chǎn)品名稱分別為鱈魚(yú)餅、鱈魚(yú)切片、無(wú)頭鱈魚(yú)、黑鱈魚(yú)、南極犬牙魚(yú)和鱈魚(yú)柳，但檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)其不屬于常見(jiàn)的大西洋鱈、太平洋鱈和黑線鱈，也不屬于鱈科魚(yú)類(lèi)。為進(jìn)一步驗(yàn)證qPCR體系的檢測(cè)結(jié)果，采用常規(guī)PCR方法對(duì)20種檢測(cè)樣品進(jìn)行擴(kuò)增并將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序（2.1.4.2）。結(jié)果顯示，qPCR體系檢測(cè)出的陽(yáng)性結(jié)果與DNA測(cè)序結(jié)果一致。二者的區(qū)別在于：1號(hào)和5號(hào)樣品測(cè)序結(jié)果顯示為單一

28果一致，說(shuō)明了本研究中設(shè)計(jì)的針對(duì)3種鱈魚(yú)以及鱈科鱈魚(yú)的4種LAMP體系具有較強(qiáng)的特異性，可用于鱈魚(yú)物種的快速鑒定。圖3.1LAMP熒光法（上）和LAMP指示劑法（下）的特異性檢測(cè)Fig.3.1SpecificitytestoffluorescenceLAMP(top)andvisualLAMP(bottom)assays.注：1.在A，B，C中，“其它”代表除該體系針對(duì)的目標(biāo)鱈魚(yú)外的物種；lane1：目標(biāo)鱈魚(yú)；lane2-3：非目標(biāo)鱈魚(yú)；lane4-5：非鱈魚(yú)物種；lane6:空白對(duì)照。2.在D中，“其它”代表除3種目標(biāo)鱈魚(yú)物種外的非鱈科物種；lane1：大西洋鱈魚(yú)；lane2：太平洋鱈魚(yú)；lane3：黑線鱈；lane4：南極犬牙魚(yú)；lane5：異鱗蛇鯖；lane6：空白對(duì)照。3.GMO：大西洋鱈；GMA：太平洋鱈；MA：黑線鱈；DE：南極犬牙魚(yú)；FL：異鱗蛇鯖；CK：空白對(duì)照。Note:1.In(A,B,andC),othersrepresentedthenon-targetcodspeciesandnon-codspecies;lane1:targetcodDNA,lane2-3:non-targetcodspecies;lane4-5:non-codspecies;lane6:theblankcontrol.2.In(D),othersrepresentedthenon-codspeciestestedinthisstudy.lane1:G.morhua;lane2:G.macrocephalus;lane3:M.aeglefinus;lane4:D.eleginoides;lane5:L.flavobrunneum;lane6:theblankcontrol.3.GMO:G.morhua;GMA:G.macrocephalus;MA:M.aeglefinus.DE:D.eleginoides;LF:L.flavobrunneum;CK:notemplatecontrols.3.2.3LAMP體系的靈敏度分析通過(guò)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在260nm波長(zhǎng)下的測(cè)定，大西洋鱈魚(yú)DNA平均濃度為285ng/μL，太平洋鱈魚(yú)DNA平均濃度為370ng/μL，黑線鱈DNA平均濃度197ng/μL。將3種鱈魚(yú)樣品的DNA進(jìn)行10倍連續(xù)梯度稀釋，用于絕對(duì)靈敏度分析。如圖3.2所示，LAMP熒光法和LAMP指示劑法的檢測(cè)限一致，在3種鱈魚(yú)的物種特異性LAMP體系中（圖3.2

【參考文獻(xiàn)】：
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