鱈魚通常指鱈形目魚類,包含大西洋鱈魚、太平洋鱈魚、黑線鱈等經(jīng)濟價值較高的重要魚類。在我國,鱈魚的消費量逐年遞增,市售鱈魚種類繁多,其市場價格也差異懸殊。然而,大多數(shù)鱈魚被加工制成冷凍魚片等產(chǎn)品進行銷售,而且產(chǎn)品包裝缺乏正確的學名標注。消費者難以從外觀上辨別出鱈魚的真假和所屬種類,由此造成了鱈魚市場命名混亂,以次充好的復雜現(xiàn)狀。因此,急需建立一些快速準確、簡便實用的檢測方法應用于市售鱈魚成分的檢測。本文以鱈科鱈魚為研究對象,選擇易與鱈魚混淆的南極犬牙魚和異鱗蛇鯖為陰性對照,采用熒光定量聚合酶鏈式反應（qPCR）體系、環(huán)介導等溫擴增技術(shù)（LAMP）以及膠體金（AuNPs）比色檢測技術(shù)對其進行種類鑒定與分析。主要研究結(jié)果如下:1.選擇16S rDNA基因設計區(qū)分鱈科和非鱈科魚類的引物,選用線粒體Cytb基因分別設計針對大西洋鱈魚、太平洋鱈魚、黑線鱈、南極犬牙魚以及異鱗蛇鯖的物種特異性引物,建立qPCR體系,對其進行物種鑒定分析。檢測結(jié)果表明,所建立的qPCR體系具有良好的特異性和重復性,其中16S rDNA qPCR體系能夠快速有效區(qū)分鱈科與非鱈科物種,5種物種特異性qPCR體系能有效鑒定目... 

【文章來源】：浙江工商大學浙江省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

6SrDNAqPCR體系和物種特異性qPCR體系的絕對定量標準曲線

18圖2.316SrDNAqPCR體系和物種特異性qPCR體系的相對定量標準曲線Fig.2.3Relativequantitativestandardcurvesofspecies-specificand16SrDNAgenesinqPCRassay注：a：混合鱈魚樣品在16SrDNAqPCR體系中的相對定量標準曲線；b：混合鱈魚樣品在物種特異性qPCR體系中的相對定量標準曲線。GMO：大西洋鱈魚；GMA：太平洋鱈魚；MA：黑線鱈；DE：南極犬牙魚；FL：異鱗蛇鯖。Note:a:Relativequantitativestandardofmixedsamplesin16SrDNAqPCRsystem;b:Relativequantitativestandardcurveofmixedsamplesinaspecies-specificqPCRsystem.GMO:G.morhua;GMA:G.macrocephalus;MA:M.aeglefinus;DE:D.eleginoides;LF:L.flavobrunneum.2.2.6市售鱈魚及鱈魚深加工制品的檢測從當?shù)厥袌鲑彽?0種鱈魚產(chǎn)品（其中包括5種深加工制品），采用本研究建立的qPCR體系進行物種檢測。檢測結(jié)果如表2.4所示，20種檢測樣品中有14種在16SrDNA體系中顯示陽性，表明其確實屬于鱈科（與產(chǎn)品標簽一致）。其中挪威北極鱈（8號和9號樣品）是大西洋鱈魚中的一種，是挪威海產(chǎn)局為了強調(diào)產(chǎn)地和物種另起的商品名稱。2種深加工樣品（1號和5號）中出現(xiàn)大西洋鱈魚和太平洋鱈魚同時檢出的現(xiàn)象，由于國內(nèi)市場中太平洋鱈魚價格低于大西洋鱈魚，說明在市售鱈魚的加工制品中存在以次充好的現(xiàn)象。值得注意的是，3、6、7、11、17、19號樣品產(chǎn)品名稱分別為鱈魚餅、鱈魚切片、無頭鱈魚、黑鱈魚、南極犬牙魚和鱈魚柳，但檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)其不屬于常見的大西洋鱈、太平洋鱈和黑線鱈，也不屬于鱈科魚類。為進一步驗證qPCR體系的檢測結(jié)果，采用常規(guī)PCR方法對20種檢測樣品進行擴增并將擴增產(chǎn)物進行測序（2.1.4.2）。結(jié)果顯示，qPCR體系檢測出的陽性結(jié)果與DNA測序結(jié)果一致。二者的區(qū)別在于：1號和5號樣品測序結(jié)果顯示為單一

28果一致，說明了本研究中設計的針對3種鱈魚以及鱈科鱈魚的4種LAMP體系具有較強的特異性，可用于鱈魚物種的快速鑒定。圖3.1LAMP熒光法（上）和LAMP指示劑法（下）的特異性檢測Fig.3.1SpecificitytestoffluorescenceLAMP(top)andvisualLAMP(bottom)assays.注：1.在A，B，C中，“其它”代表除該體系針對的目標鱈魚外的物種；lane1：目標鱈魚；lane2-3：非目標鱈魚；lane4-5：非鱈魚物種；lane6:空白對照。2.在D中，“其它”代表除3種目標鱈魚物種外的非鱈科物種；lane1：大西洋鱈魚；lane2：太平洋鱈魚；lane3：黑線鱈；lane4：南極犬牙魚；lane5：異鱗蛇鯖；lane6：空白對照。3.GMO：大西洋鱈；GMA：太平洋鱈；MA：黑線鱈；DE：南極犬牙魚；FL：異鱗蛇鯖；CK：空白對照。Note:1.In(A,B,andC),othersrepresentedthenon-targetcodspeciesandnon-codspecies;lane1:targetcodDNA,lane2-3:non-targetcodspecies;lane4-5:non-codspecies;lane6:theblankcontrol.2.In(D),othersrepresentedthenon-codspeciestestedinthisstudy.lane1:G.morhua;lane2:G.macrocephalus;lane3:M.aeglefinus;lane4:D.eleginoides;lane5:L.flavobrunneum;lane6:theblankcontrol.3.GMO:G.morhua;GMA:G.macrocephalus;MA:M.aeglefinus.DE:D.eleginoides;LF:L.flavobrunneum;CK:notemplatecontrols.3.2.3LAMP體系的靈敏度分析通過紫外-可見分光光度計在260nm波長下的測定，大西洋鱈魚DNA平均濃度為285ng/μL，太平洋鱈魚DNA平均濃度為370ng/μL，黑線鱈DNA平均濃度197ng/μL。將3種鱈魚樣品的DNA進行10倍連續(xù)梯度稀釋，用于絕對靈敏度分析。如圖3.2所示，LAMP熒光法和LAMP指示劑法的檢測限一致，在3種鱈魚的物種特異性LAMP體系中（圖3.2

【參考文獻】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3319952