本文關(guān)鍵詞：蓮子心生物堿與丹酚酸B提取分離及其與生物大分子相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本論文利用高速逆流色譜法對(duì)幾種天然活性物質(zhì)進(jìn)行了分離純化，并采用多種光譜法(熒光光譜法、同步熒光光譜法、圓二色譜法、紫外光譜法)相結(jié)合的手段，研究了小分子與生物大分子血清白蛋白的相互作用。本論文分為四章，各章內(nèi)容概述如下。 1、引用大量的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)。介紹了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能，天然產(chǎn)物活性成分的提取、分析和分離純化的方法。概述了小分子與生物大分子血清白蛋白的相互作用的研究方法、研究?jī)?nèi)容和研究意義等，并提出了本論文的選題思想。 2、具體闡述了幾種天然活性小分子的提取、分析以及分離純化的方法和步驟。通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到了蓮子心中三種生物堿的pH區(qū)帶高速逆流色譜分離體系，n-己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=5:5:2:8(v/v)，上相有機(jī)相加10mmol/L的TEA作為固定相，下相水相加入5mmol/L的HCl作為流動(dòng)相；丹參中丹酚酸B的pH區(qū)帶高速逆流色譜分離體系，叔丁基甲醚：水＝1：1(v/v)，上層有機(jī)相加10mmol/L三氟乙酸作為固定相，下層水相加10mmol/L氨水，作為流動(dòng)相。分離得到四種高純度的單體物質(zhì)(蓮心堿、異蓮心堿、甲基蓮心堿和丹酚酸B)，并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定，為以后的實(shí)驗(yàn)提供物質(zhì)基礎(chǔ)。 3、利用多光譜法(熒光光譜法、紫外光譜法、同步熒光光譜法)對(duì)蓮子心中三種雙芐基異喹啉生物堿(蓮心堿、異蓮心堿和甲基蓮心堿)與牛血清白蛋白(BSA)的相互作用進(jìn)行了研究。通過(guò)計(jì)算得到各生物堿-BSA結(jié)合體系的結(jié)合常數(shù)(K)，結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)，結(jié)合距離(r)以及熱力學(xué)常數(shù)H0， S0和G0；同步熒光光譜反映了生物堿使BSA的構(gòu)象發(fā)生了變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：蓮心堿和甲基蓮心堿與BSA的結(jié)合作用力主要為范德華力和氫鍵；而異蓮心堿與BSA的結(jié)合主要作用力類(lèi)型為靜電引力。根據(jù)綜合表征參數(shù)Y值以及三種生物堿的結(jié)構(gòu)式比較表明，生物堿與BSA的結(jié)合反應(yīng)的反應(yīng)強(qiáng)度依次為蓮心堿甲基蓮心堿異蓮心堿。 4、在模擬生理?xiàng)l件下，采用熒光光譜法、同步熒光光譜法、圓二色譜法和紫外光譜法相結(jié)合的方法對(duì)丹參中丹酚酸B與BSA的相互作用進(jìn)行了研究。通過(guò)計(jì)算得到各丹酚酸B-BSA結(jié)合體系的結(jié)合常數(shù)(K)，，結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)，結(jié)合距離(r)以及熱力學(xué)常數(shù)H0， S0和G0；同步熒光光譜和圓二色譜結(jié)果表明丹酚酸B的存在使BSA得構(gòu)象發(fā)生了改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：靜態(tài)猝滅和非輻射能量轉(zhuǎn)移導(dǎo)致了BSA的熒光猝滅；丹酚酸B-BSA體系是一個(gè)自發(fā)的過(guò)程，靜電作用力是兩者結(jié)合的主要作用力類(lèi)型。此外，常見(jiàn)的金屬離子Cu2+和K+的加入使得該體系的結(jié)合常數(shù)減小。 5、研究不同干燥方法(微波、鼓風(fēng)干燥、陰干)對(duì)金銀花的抗氧化活性和總酚、總黃酮含量的影響。利用魯米諾化學(xué)發(fā)光體系，以抗壞血酸為陽(yáng)性對(duì)照，以超氧陰離子(O2-)清除、雙氧水(H2O2)清除和羥基自由基(HO)清除為指標(biāo)，評(píng)價(jià)3種不同干燥方法對(duì)金銀花的抗氧化活性的影響，并對(duì)總酚和總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行了測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：金銀花具有較強(qiáng)的抗氧化活性；不同的干燥方法對(duì)其活性物質(zhì)的含量以及抗氧化活性的強(qiáng)度均有較強(qiáng)的影響，其中70C微波干燥10min條件下，金銀花總酚和總黃酮的含量最高，分別為30.402.75mg/g、61.247.62mg/g，并且其抗氧化活性最強(qiáng)，三種指標(biāo)的IC50分別為金銀花原提取液濃度的9.44%、0.029%、0.12%。而自然陰干4天的條件下，金銀花的總酚和總黃酮的含量最低，分別為10.220.81mg/g、17.502.28mg/g，并且抗氧化活性最弱，三種指標(biāo)的IC50分別為金銀花原提取液濃度的11.97%、0.53%、0.37%。
【關(guān)鍵詞】：相互作用 小分子 牛血清白蛋白 熒光猝滅
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：O657.3;R284.2
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一章 綜述12-28
• 1. 引言12
• 2. 血清白蛋白的結(jié)構(gòu)和功能12-15
• 2.1 血清白蛋白的結(jié)構(gòu)12-14
• 2.2 血清白蛋白的功能14-15
• 3. 天然產(chǎn)物的提取、分析和分離純化方法15-17
• 3.1 天然產(chǎn)物的提取方法15-16
• 3.2 天然產(chǎn)物的分析方法16
• 3.3 天然產(chǎn)物的分離純化方法16-17
• 4. 蓮子心生物堿及丹酚酸 B 的藥理作用17-18
• 5. 小分子物質(zhì)與血清白蛋白的相互作用18-28
• 5.1 研究方法的進(jìn)展18-22
• 5.2 研究參數(shù)22-26
• 5.3 研究目的、意義及論文研究?jī)?nèi)容26-28
• 第二章 丹酚酸 B 和蓮子心中三種雙芐基異喹啉生物堿提取制備28-37
• 1. 引言28-29
• 2. 材料與儀器29-30
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑29
• 2.2 儀器設(shè)備29-30
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法30-31
• 3.1 樣品的制備30
• 3.2 兩相溶劑系統(tǒng)的配制30
• 3.3 分配系數(shù)(K)的測(cè)定30
• 3.4 高速逆流色譜分離30-31
• 3.5 HPLC 檢測(cè)條件31
• 4. 討論31-35
• 4.1 pH 區(qū)帶逆流色譜分離條件的優(yōu)化31-34
• 4.2 蓮子心生物堿的鑒定34-35
• 4.3 丹酚酸 B 的鑒定35
• 5. 結(jié)論35-37
• 第三章 蓮子心中三種雙芐基異喹啉生物堿與牛血清白蛋白相互作用的光譜法研究37-44
• 1. 引言37
• 2. 實(shí)驗(yàn)部分37-38
• 2.1 儀器與試劑37
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法37-38
• 3. 結(jié)果與討論38-43
• 3.1 三種生物堿對(duì) BSA 的熒光猝滅機(jī)理38-39
• 3.2 結(jié)合常數(shù) K 和結(jié)合位點(diǎn)數(shù) n 的計(jì)算39-40
• 3.3 結(jié)合距離 r 的計(jì)算40
• 3.4 作用力類(lèi)型的確定40-41
• 3.5 生物堿對(duì) BSA 的構(gòu)象的影響41-42
• 3.6 生物堿-BSA 反應(yīng)體系的特性42-43
• 4. 結(jié)論43-44
• 第四章 丹參中丹酚酸 B 與牛血清白蛋白的相互作用的光譜法研究44-52
• 1. 引言44
• 2 實(shí)驗(yàn)部分44-45
• 2.1 材料與儀器44
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法44-45
• 3 結(jié)果與討論45-51
• 3.1 丹酚酸 B 與 BSA 相互作用的熒光猝滅機(jī)理45-47
• 3.2 結(jié)合常數(shù) K 和結(jié)合位點(diǎn)數(shù) n 的計(jì)算47-48
• 3.3 結(jié)合距離 r 的計(jì)算48
• 3.4 作用力類(lèi)型的確定48-49
• 3.5 丹酚酸 B 對(duì) BSA 構(gòu)象的影響49-50
• 3.6 金屬離子對(duì)丹酚酸 B-BSA 體系的影響50-51
• 4. 結(jié)論51-52
• 第五章 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)不同干燥方法對(duì)金銀花抗氧化活性和化學(xué)成分的影響52-60
• 1. 引言52
• 2. 儀器與材料52-53
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法53-56
• 3.1 金銀花的干燥和提取53
• 3.2 金銀花提取液化學(xué)成分的測(cè)定53-54
• 3.3 金銀花提取液抗氧化活性實(shí)驗(yàn)54-55
• 3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析55-56
• 4. 結(jié)果與討論56-58
• 4.1 不同干燥方法處理的金銀花提取液中總酚、總黃酮含量56
• 4.2 金銀花提取物對(duì) O2-的清除作用56-57
• 4.3 金銀花提取物對(duì) H2O2的清除作用57-58
• 4.4 金銀花提取物對(duì) HO 的清除作用58
• 5. 結(jié)論58-60
• 第六章 結(jié)論60-62
• 致謝62-63
• 參考文獻(xiàn)63-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況69

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：蓮子心生物堿與丹酚酸B提取分離及其與生物大分子相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：306991