熒光探針技術(shù)由于操作簡(jiǎn)單,成本低及檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn),在各類核酸目標(biāo)物的檢測(cè)中應(yīng)用。然而,待測(cè)目標(biāo)物的含量往往很低,需要通過擴(kuò)增技術(shù),以實(shí)現(xiàn)高靈敏的測(cè)定。信號(hào)放大擴(kuò)增策略通過分子擴(kuò)增技術(shù),可以用來檢測(cè)酶活性、核酸和單堿基錯(cuò)配等多種物質(zhì),而DNA鏈置換反應(yīng)就是信號(hào)放大的新機(jī)理之一。堿基錯(cuò)配的特異性識(shí)別,為疾病的診斷及治療提供了重要的依據(jù),若能夠開發(fā)出對(duì)單個(gè)堿基錯(cuò)配具有特異性識(shí)別的探針,那將對(duì)醫(yī)學(xué)界的疾病診斷提供一定的幫助。在本論文中,我們利用協(xié)同反應(yīng)設(shè)計(jì)了一種信號(hào)放大的DNA鏈置換開關(guān),構(gòu)建了DNA堿基錯(cuò)配識(shí)別的探針,用于寡核苷酸和單堿基錯(cuò)配的識(shí)別。通過熒光和聚丙烯酰胺凝膠電泳驗(yàn)證了該探針的可行性與重現(xiàn)性。具體研究?jī)?nèi)容如下:（1）基于雙目標(biāo)響應(yīng)的DNA鏈置換開關(guān)的研究:本章節(jié)利用協(xié)同反應(yīng),設(shè)計(jì)了一種基于雙目標(biāo)響應(yīng)的DNA鏈置換開關(guān)。其原理是兩條低濃度且序列不同的目標(biāo)鏈,共同作用于探針的兩端支點(diǎn);然后發(fā)生協(xié)同雜交鏈置換反應(yīng),并釋放出下一步鏈置換反應(yīng)的支點(diǎn)域。通過熒光和凝膠電泳的表征手段,驗(yàn)證了該方法具有良好的可行性與重現(xiàn)性。我們對(duì)寡核苷酸不同支點(diǎn)長(zhǎng)度的調(diào)節(jié),驗(yàn)證了協(xié)同反應(yīng)的可調(diào)控性,并表現(xiàn)出不... 

【文章來源】：湘潭大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 單堿基錯(cuò)配
        1.1.1 單核苷酸多態(tài)性的產(chǎn)生
        1.1.2 單核苷酸多態(tài)性作為基因分型的原因
        1.1.3 單核苷酸多態(tài)性的方法與分類
        1.1.4 用單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)的方法
        1.1.5 單核苷酸多態(tài)性基因分型的應(yīng)用
    1.2 鏈置換反應(yīng)的原理及應(yīng)用
        1.2.1 DNA和 RNA的檢測(cè)
        1.2.2 蛋白質(zhì)的檢測(cè)
    1.3 DNA鏈置換信號(hào)循環(huán)放大的技術(shù)
        1.3.1 雜交鏈反應(yīng)放大技術(shù)
        1.3.2 HCR實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)
    1.4 選題思路及研究?jī)?nèi)容
第2章 基于雙目標(biāo)響應(yīng)的DNA鏈置換開關(guān)的研究
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 儀器與試劑
        2.2.2 熒光光譜測(cè)量
        2.2.3 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 雙目標(biāo)驅(qū)動(dòng)的信號(hào)循環(huán)放大反應(yīng)機(jī)理
        2.3.2 合作支點(diǎn)雜交機(jī)制
        2.3.3 單邊循環(huán)信號(hào)放大原理
    2.4 小結(jié)
第3章 基于雙目標(biāo)響應(yīng)的DNA堿基錯(cuò)配的研究
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 儀器與試劑
        3.2.2 熒光檢測(cè)
        3.2.3 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)原理
        3.3.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳驗(yàn)證機(jī)理
        3.3.3 探針比列的實(shí)時(shí)優(yōu)化
        3.3.4 DNA目標(biāo)鏈的濃度梯度實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)
        3.3.5 不同堿基錯(cuò)配的熒光光譜測(cè)量
        3.3.6 DNA堿基錯(cuò)配的實(shí)時(shí)熒光監(jiān)測(cè)
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷及在校期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3048972